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[免疫学实验技术] 有关Western转膜问题

1^# 大中小发表于 07-9-4 16:45 只看该作者

有关Western转膜问题

半干电转法转PVDF膜，我的蛋白大小约37KDa，恒流，0.8mA/cm2，大约转多长时间为最合适，有哪位大虾是这方面的高手，可否赐教一二

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纤夫

2^# 大中小发表于 07-9-5 09:01 只看该作者

不知道楼主用的什么牌子的半干转印仪，俺们用的是Biorad的，常规都是用恒压，25v，转印25分钟，37kd的也没问题。用的是MILLIPORE的PVDF膜，以及BIORAD的超厚滤纸(170-3958 Extra Thick Blot Paper, 滤纸也很重要哦，呵呵)叠三明治。

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jonathan226
Rank: 1

3^# 大中小发表于 07-9-5 10:28 只看该作者

转印仪的牌子是一样的，我看的有关资料说恒流为宜，我一般转1个小时，以前没有考虑过滤纸厚薄问题，滤纸厚度有什么影响？是不是厚滤纸干的慢些，有利于转膜速率的恒定？

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zhumulangma
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4^# 大中小发表于 07-9-12 09:22 只看该作者

我的经验是滤纸后点，转的效果更好

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ustcbio509
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5^# 大中小发表于 08-6-20 22:35 只看该作者

这个和用什么膜有关系吗？如果我们用的是NC膜，15V*20min是不是有点短？
上下都6层滤纸，40kDa的蛋白。
注：我们用的也是伯乐的半干转仪，
转膜buffer应该是全世界都一样吧？

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