为了提高基因酷PCR论坛专业技术水准,经斑竹内部讨论现开创"酷库PCR论坛"讨论专集

1.每月定时开展2个有质量的专题讨论,讨论题目可以来自求助问题,也可以由酷友提供.

2.酷友提供较好的讨论题目将给予2-5个威望的奖励.

3.积极参与讨论的战友将给予1-5个威望的奖励.

4.欢迎各位前来参与讨论!!!

本月"酷库PCR论坛"讨论题目(由本人杜撰):

1.请问质粒载体中amp或kan等抗性的工作原理是什么?
2.在质粒载体图谱中经常看到是amp或kan,没有看到启动子,那么其是否有启动子驱动?
3.kan抗性和neo基因抗性差异和应用区别是什么?

可以针对任一议题讨论,全讨论到奖励增加!

[ 本帖最后由 kaige88 于 07-9-1 11:14 编辑 ]

我来试一下第一个问题：
  Amp主要是由菌落分泌到胞外的beta-内酰胺酶降解而产生耐药性的，所以amp降解后在菌体周围会形成一个无抗生素圈，菌落在无抗生素的圈内生长速度会较快，这也是卫星菌落形成的原因。
  Kan主要是由菌体中产生的酶对Kan进行修饰而使kan无效的。kan平板上就不会形成卫星菌落。

强烈支持！！

请问三楼？什么是卫星菌落呢？我是新手！前两天用Kan为抗生素做转化，板子只有周边有一点菌落，我挑了10个单克隆都摇菌摇不出来，不知道为什么？ 转化中哪部是我需要注意的？请指教！谢谢你了！

尝试回答一下第二问：
Amp和Kan来自相应菌株基因组或质粒的完整基因拷贝，本身就带有相应的启动子等元件。
如Amp即为beta-lactamase（beta-内酰胺酶）基因好像是来自于 RP1 plasmid，从NEB pUC19序列详情中就有标明了其相应的CDS和启动子序列。
2486-1626      beta-lactamase (bla; amp-r) CDS
2535-2530      bla promoter -10 sequence (GAGACA)
2556-2551      bla promoter -35 sequence (TTCAAA)