常见问题分析
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1. 从一个鸡蛋中能纯化多少IgY抗体,抗体的纯度如何?
; L4 `; z3 O1 s7 U 每ml鸡蛋黄中有3-5mgIgY抗体。每个蛋中大约有60-100mgIgY抗体。一般特异抗体占总多克隆抗体的2-10%。用基本方法纯化的IgY抗体的纯度为75%。进一步(供选择,15分钟),用溶液B作第二次沉淀,使抗体的纯度达90%,抗体的得率无明显下降。
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2. 从鸡中产生抗体较兔中产生抗体有什么优点?
6 a& U& B* e4 `" G, Q! _(1) 稳定的抗体来源
/ H7 R% m) Q4 ^7 y5 | 1个鸡蛋含有的抗体和1只兔中1次取血的抗体量相同。收蛋简单、温和。鸡一般1天下1个蛋,而兔却只能每2-3周抽1次血。
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(2) 降低免疫程控
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鸡只需作1个月的免疫程控,就可获得高滴度抗体。让兔产生高滴度抗体,免疫时间需2-3个月。
' n1 j! s6 [. P(3) 降低非特异结合
# z: w' [7 h; ~$ y+ L4 w- d+ H 鸡的IgY不结合细菌和哺乳动物的Fc抗体。
( ^# V: R* N% O+ D% Y(4) 对哺乳动物的抗原有效
/ y b! ~) ~% _ 由于鸟和哺乳动物在遗传上相差远,鸡在产生抗保守哺乳动物蛋白的抗体时非常有效。高度保守的哺乳动物蛋白在兔中不能引起免疫应答,但在鸟类中却可成功地得到抗这些蛋白的抗体
2 S- `; _# {0 y# j! O) b3. IgY抗体和从兔、山羊中产生的抗体有什么差别?
6 T! a5 q* k P# N; w 蛋黄IgY抗体是哺乳动物IgG抗体的180kDa同源物。适合于免疫印迹,ELISA和其它一般的免疫操作。