我在做单抗中，碰到几个问题，请教大家：
1.Sp2/0在融合前生长反而不好，有死亡现象，是否因为培养过久，传代过多所致？大概养了3周。
2.在做融合实验前我采集小鼠血清，请问血清在－20度能存多久？抗体效价是否会下降？
3.融合后铺的96孔板换液时枪头需不需要每一孔都换啊？一般是半换液还是全换液呢？如果在融合一周后换，培养上清中不是可能有抗体吗？弃之？
4.我前一段时间自配了HT母液，－20度分装冻存，前天拿出来配应用液时发现有一层东西黏附在冻存管周围？请问是怎么回事？还能用吗？

还有：
我制备的有的饲养细胞板中饲养细胞不多，感觉融合细胞生长状态不好，是否需要补种饲养细胞？

1.传代过多会引起细胞的反祖或变异现象，由于SP2/0为缺陷株，在不能确定是否对HAT培养基敏感的情况下，可用8－杂氮嘌呤处理。但这不会引起细胞的死亡现象，死亡现象可能是由于细胞本身活力和培养基的原因，建议用与融合后培养的同种培养基，血清浓度达15％以上时，应该传代培养不需3周。这个时间太长。 2.半年应该没有问题，最好分装保存。 3.枪头可以不每孔一换，但要保证不污染。我们是3天后直接补加，后期依细胞生长状态换液，半换较好些。一般克隆形成依铺板时细胞数量的不同，时间长短也不同。一周内克隆的个体一般不会太大，换液没有问题，若开始分泌抗体，换液后两天即可达到应有的水平，不会影响检测。不过如果克隆已经很明显，则可直接检测该上清。 4.没遇到过这类情况，不好说。 最好不要采用了。 5.可以补加但要小心造成污染，如果可以转孔的化最好把细胞注入24孔培养板使补加饲养细胞比较稳妥。

至于HAT我觉的最好使用商品化的SIGMA、GIBCO都有，很稳定。