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不同的基因在同一时期的表达量关系
cuilinzhiniao
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发表于 07-8-16 19:08
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不同的基因在同一时期的表达量关系
各位,我现在想研究一下不同的基因在同一时期的表达量大小,请问有什么办法啊,感觉像半定量,定量PCR,还有杂交,以及RNase保护试验都不是很适合啊,大家有没有做过这方面的研究啊
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cuilinzhiniao
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发表于 07-8-16 22:40
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自己补充一点
这几种方法我都知道,也有一定的了解,问题是
1.利用PCR的问题:由于是不同基因,所以引物是不一样的,引物本身就有一个扩增效果好坏的问题。既使是同一个基因我们用不同引物扩增的效果也不一样,何况是不同基因呢?那么你又怎么保证定量的效果呢?
2 Western blot 我不是很清楚,但是如果我研究的是很多基因,那工作量是不是太大了啊,而且很难说所有表达的蛋白都有活性,或许连一抗都作不出来。
还有一个问题用杂交方法的时候,是不是所有探针或者是一抗的量要保证一样呢?
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biobowl
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发表于 07-9-23 17:29
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首先不太明白您的实验为了干什么? 同一时期不同基因的表达量, 不知有什么意义.
关于您对PCR定量的担心, 考虑不同基因的扩增效率是对的, 但您要注意Realtime PCR的原理, 以相对定量为例, 它通过目的gene标准品做标准曲线校正, 最终得到是表达的水平, 已经是考虑了扩增效率的问题了.因而担心扩增效率是不必要的.
western的问题, 作抗体不一定要生物活性蛋白, 原核表达的包涵体也可以.
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qzhaojing
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发表于 07-9-28 23:50
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johny
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发表于 07-10-6 14:42
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binbintt
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发表于 07-10-8 12:37
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回复 #5 johny 的帖子
最好的办法利用Q-pcr来进行mRNA的表达量的检测。
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binbintt
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发表于 07-10-8 12:40
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回复 #6 binbintt 的帖子
不知道你是不是研究的功能基因,如果不是好像这个试验就没有任何意义了哦,只有研究功能基因,才可以利用这个方法从转录水平来判断基因表达情况。因为非功能基因在翻译上存在一定差异所以不适合这个试验
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