要进行细胞蛋白的提取。资料上都是说要先用PBS洗。要用PH多少的啊?ph对蛋白的提取有没有影响啊?
希望能给出具体的配方！万分感谢！

ph对蛋白的提取肯定是有影响的,所说的缓冲液只是相对于其缓冲能力而言的,另外还得考虑温度对ph的影响!

引用:

原帖由 1012203 于 07-7-31 14:06 发表
ph对蛋白的提取肯定是有影响的,所说的缓冲液只是相对于其缓冲能力而言的,另外还得考虑温度对ph的影响!

谢谢！！
那请问提取蛋白一般要用PH值多少的啊？浓度也会有影响吧？多大浓度的合适啊?

缓冲液浓度一般遵循该缓冲液种类常用浓度即可，PBS一般10-100mM，100mM缓冲能力强，但是可能与后面实验有冲突，10mM缓冲能力弱，可能在提取过程中产生pH较大变化，所以在此区间内你可以自己选择浓度
至于pH是多少，和你自己实验要求有关，如果没有特殊要求，常用pH为7.4

[ 本帖最后由 nano 于 07-8-1 08:00 编辑 ]

感谢！感谢！

用PBS缓冲液洗下来的细胞蛋白为什么会有异味？不知道你们是否有更好的解决办法。在蛋白提取的时候除了温度会影响活性，还有什么因素会有影响？蛋白诱导时间一般为多少时间最好？

异味是不是你添加的蛋白抑制剂比如PMSF之类的发出的？

至于你的后两个问题最好参照你使用的表达系统的manual，很难笼统地回答。

引用:

原帖由 凌寒冰 于 08-5-17 13:15 发表
用PBS缓冲液洗下来的细胞蛋白为什么会有异味？不知道你们是否有更好的解决办法。在蛋白提取的时候除了温度会影响活性，还有什么因素会有影响？蛋白诱导时间一般为多少时间最好？ ...

诱导时间你在各个时间点取样检测就知道哪个是最合适的，不同蛋白肯定不一样。

谢谢,谢谢大家

提取细菌蛋白的所有过程都在4度中进行的话,提取的蛋白活性是不是就高的有.是否可行,有什么影响吗?