前两天做出的PCR，最近几天以同样的条件做做总也没有目的条带，而且引物部分很亮！比marker亮多了，做了个引物的梯度，还是很亮！！然后做了个隐性对照（未加模版），结果引物还是那么亮！！现在我初步相信是引物的问题了，可是为什么会出现这种状况哪？？以前加体系的时候，有过从绝对没有酶及模版，其他都可能有的溶液中，也没有换枪头的经历， 现在想想不会是因为那个吧！请大家帮忙分析一下原因！谢谢！

我倒觉得是模板问题，是不是模板降解了，如果还有标本的话，重新提一下标本再PCR。

谢谢！！那我还是重新提一次试试，但是如果用这个模版，能把别的片段P出来，那就说明不是模版的问题了吧？？
不管怎么说，打算重新提DNA了 。。。。。

对，可以先试试扩增其他的比较稳定表达的基因片断，如果没有问题，模板应该还是可以的，那你可以电泳检测一下DNA模板看看怎么样啊，PCR的问题不好说，可以用新配制的其他试剂试试，DNA没有污染的话还是相对稳定的，不要着急先提DNA，建议换一下其他PCR试剂。

我的倒是能p出目标带来，但是很淡，奇怪得很

目的条带淡但是很特异的话，不妨降低一下退火的温度看一下。

这样可以提高每轮PCR的引物与模板结合的效率，从而最终提高PCR的产物的量。

祝好运