最近实验室做RT的人不少，有直接做RT-PCR的，也有做real-time RT-PCR的；有的是扩增基因做克隆，有的是做半定量比较表达量。好几个版本的反转录酶，呵呵，有点乱...

统计了下，有Promega的AMV，MMLV，还有Takara的AMV，还有一些国产的如原平皓的Turbo RT。比较了下，似乎MMLV价格还可以接受，扩增效果还可以。

我用过MBI的MMLV两步法的反转录试剂盒，感觉还不错：）

     我用过东洋仿TOYOBO的AMV，比较便宜，100次450元钱，非常好用。
    当然还用过好东西，那就是invitorgen公司的super II AMV以及super III AMV，用过他们的一步法试剂盒，也用过含着两种酶的两步法（前者大概要3000，后者1800左右），也还不错。
      如果是扩增未知基因或者是对mRNA要求高的，那么选用invitrogen的比较好，当然东洋仿的也不错哈！
      

从性价比角度，天根（就是天为时代）的比较放心。

国产的天根质量还不错。 国外的，Takara，Promega和NEB的AMV和MMLV价格相差不是很大，效果都比较理想。如果使用来做检测，建议采用MMLV，便宜些，效果也足够。如果是用来扩增目的片段，可选用AMV。 如果是长片段，可选用invitrogen的Superscript II or III逆转录酶。以前实验室一直用NEB的vent，效果也很好。 Takara的Rnase H-的逆转录酶似乎出了新品，效果也很好。

RT钓基因做过一些，我用的一直是生工的AMV，效果还不错。

大家说以下大体价格呀？

你们是买试剂盒还是只买酶？

请问大家用的NEB的MMLV是按照什么步骤？说明书上没有啊！谢谢！

引用:

原帖由 seadreamlv 于 2007-12-23 11:58 发表
请问大家用的NEB的MMLV是按照什么步骤？说明书上没有啊！谢谢！

使用方法:

• 在无菌管中加入以下样品:
  总RNA 1-10 µl (1 ng-2 µg)
  逆转录引物 2 µl
  dNTP混合物 4 µl
  加无核酸酶污染水至 16 µl
• 70°C加热5分钟，短暂离心后置于冰上。
• 混合以下样品：
  步骤1的RNA/引物/dNTP 16 µl
  10×RT反应缓冲液 2 µl
  RNase抑制剂 1 µl
  M-MuLV反转录酶 1 µl
  总体积 20 µl
• 42°C温育1小时。
• 95°C 5分钟使酶失活。
  如果需要用RNase H处理，进行步骤6。否 则，进行步骤7。
• 加RNase H 1 µl (2 units)，37°C作用20分钟降解RNA。然后95°C 5分钟使酶失活。
• 用无核酸酶污染水将反应体系稀释到50µl，取2-5 µl进行PCR扩增反应。