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【讨论】急求各位大侠帮助,谢谢!


武林三国

【讨论】急求各位大侠帮助,谢谢!

请问各位大侠,我最近做了几次PCR,每次跑出的需要的条带时,总有比条带更大的DNA片段是怎么回事?

再次请教各位,谢谢!

我PCR后跑的结果如上,请问我跑出带的上面有条带是什么原因呢?令外,我为什么前面总有一条较小的带,是引物带的大小,是引物过量的原因吗?

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Re: 【讨论】急求各位大侠帮助,谢谢!

讲的还不太清楚。比如,什么时候出现更大的条带?约在多少bp? 个人认为,小分子量的条带是引物二聚体,大分子量的带是某种非目的的PCR产物。 从图片上看,感觉上样量太大了。

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武林三国

Re: 【讨论】急求各位大侠帮助,谢谢!

前面前面5-8比较小的是ITS,大约在600bp左右,是我要扩的目标条带。但是在我的目标条带上面有一条更大的带,我做了很次PCR,都有这条带,我想请教是怎么回事?谢谢! 后面的11-12是18s是1700bp左右,有时候也出现大约2000bp的带,现在请大家帮忙看看,谢谢~!

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Re: 【讨论】急求各位大侠帮助,谢谢!

非常感谢版主的解答,我引物二聚体老是去出不了,是不是要降低引物用量试试呢?

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武林三国

Re: 【讨论】急求各位大侠帮助,谢谢!

减少引物用量试一下,一般如果 PCR产物的话,大多数引物都会形成引物二聚体。。。所以显得特别多。 你可以比较下你有阳性结果的lane和没PCR产物的lane...

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Re: 【讨论】急求各位大侠帮助,谢谢!

我关心的还是,为什么老是有非目的的产物,并且比我的目的片段还大,基本上每次都跑出来啊。向各位请教了!

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武林三国

Re: 【讨论】急求各位大侠帮助,谢谢!

杂带啊!调整一下退火温度应该可以去除的。

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Re: 【讨论】急求各位大侠帮助,谢谢!

好的,非常感谢版主,谢谢!我会努力的!

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