Transformation of B. subtilis
Transformation of B. subtilis cells was conducted by the following procedure (4, 224):
the B. subtilis culture was grown in Paris-Medium until it reached a cell density of
OD580 = 1. The culture was divided into 0.5 mL aliquots, plasmid DNA (0.1-1 μg) was
added and the samples were incubated for 1-3 hours at 37°C. Selection for plasmid
bearing Bacillus cells was provided on LB-agar plates containing the suitable
antibiotic. For efficient DNA uptake of pBSMuL vectors by B. subtilis, the plasmid
DNA was SacI digested and self-ligated to generate plasmid multimers before adding
to the competent cells.
Paris-medium: 60 mM K2HPO4, 40 mM KH2PO4, 3 mM Na3-citrate, 1% (w/v) glucose,
20 mM K-glutamate, 2,2 mg/L Fe(III)NH4-citrate, 0,1% (w/v) casamino acids, 20 mg/L
tryptophan, 3 mM MgSO4

请问Paris-medium中的 Fe(III)NH4-citrate和casamino acids分别是什么啊？casamino acids是水解酪蛋白复合物？
请问谁有枯草杆菌转化方面的资料吗？

casamino acids是酪氨基酸，Fe(III)NH4-citrate指的是铁(Ⅲ)铵柠檬酸啊！
  

我们实验室有人在做，他们觉得转化时感受态细胞的制备最重要，可能是决定转化效率的关键步骤

1. 一般他们都会先做感受态细胞的生长曲线，取对数末期的菌作为制备感受态细胞。做生长曲线就是为了确定对数末期的时间。

2.Transformation

转化于第一天上午取一满环枯草芽孢杆菌甘油菌划LB平板，37℃培养箱培养12h。挑单菌落至3ml LB培养基中，37℃， 250 r/min培养过夜。第二天上午取160 μl培养液转接至8 ml SPI培养基中，37℃，250 r/min培养至对数生长末期 (WB600约5 h)，取0.2 ml培养液至2 ml SPII培养基中，37℃，100 r/min培养90 min ，加入20ul 10mmol/L EGTA，再于37℃，100 r/min培养10分钟。分装成0.5 ml每管，各加入5ul DNA，再于37℃，250r/min培养90分钟，取菌液涂布筛选平板。

SP盐：0.2%( NH4 )2SO4, 1.4% K2HPO4, 0.6% KH2PO4, 0.02% MgSO4.7H2O, 0.1% 柠檬酸钠;
CAYE (100%：2 %蛋白胨，10%酵母膏)。
SPI培养基： SP盐溶液加入1 %体积浓度为50%葡萄糖溶液，1 %体积100%CAYE溶液；
SPII培养基：SPI培养基加入1 %体积50 mmol/L CaCl2溶液，1 %体积250 mmol/L MgCl2溶液；

BINBIN兄，你们实验室是转化质粒还是让外源基因插入到基因组上？ 我们实验室有人要转，准备用电转，有些问题请教下你

谢谢binbintt ，我试试！

[quote user="nano"]BINBIN兄，你们实验室是转化质粒还是让外源基因插入到基因组上？
我们实验室有人要转，准备用电转，有些问题请教下你[/quote]


nano兄，我们实验室是让外源基因插入到基因组上的哦，您有什么问题的呢，关于电转染我还在摸索中，我们使用的是bio-rad公司的电穿孔仪，该公司的电穿孔仪有个好处就是预设了很多程序可以直接使用！

一样，都是插入到基因组，也是用的BIORAD的电转仪，不过不是转枯草芽孢杆菌，是别的芽孢杆菌，还没试过，不是我本人做，想问下，你们怎么筛选转化子？加抗性基因吗，还是插入失活某个基因来鉴定？