大家好！我最近要做人IL-1（白细胞介素－1），现设计了引物，以oligo(dT）反转录的人总cDNA,结果没扩出来。想不明白，为什么人的总cDNA会没有这个基因啊？
注明：其他方面都是没有问题的，都检查过了，模板也能扩出其他的基因。

　IL-1是一种单核因子, 主要由单核细胞、巨噬细胞产生。人IL-1 a和IL-1 B分别由159 和153 个氨基酸组成, 分子量为1715kDa, 基因定位于2 号染色体。IL-1 的主要生物学功能为: ①促进胸腺细胞、T细胞的活化、增值和分化; ②刺激造血细胞和成纤维细胞产生集落刺激因子(CSF) , 增加造血细胞CSF 受体的数量并协同CSF 促进造血细胞功能。


请各位XDJM多多帮助指教！谢谢了！

    楼主，如果像你所说其他方面都没有问题，那么会不会是你的PCR体系呢？比如温度，Mg离子等，你需要优化条件不！要不就是你的引物的问题！论坛内有很多关于引物的帖子，同样也有很多关于PCR扩增的帖子！
     不能因为可以扩增出其他东西就确定自己要做的这个基因没有问题，不同的基因有不同的要求的！这个需要自己摸索的哦！

谢谢binbintt 的应助!

lily，不知道你的“人总cDNA”是怎样一个体系，是“人总cDNA文库”吗？？

一个蛋白分子的表达量决定了它的cDNA在文库中的丰度（其实是反之——即后者决定前者，只是我们一般先检测蛋白），从理论上来讲，这个蛋白在哪种细胞或组织中表达，就选取该种组织或细胞提取RNA，行RT-PCR。如果你用的“人总cDNA文库”，最好是原始的文库，如果是扩增过之后的，很难保证里面的成员不丢失。

结合自己的情况，分析一下。

祝顺利

      同意楼上兄台建议，因为不同基因的表达丰度是不同的，你首先还要确定你所抽提的RNA是否是你的目的基因表达丰度最高的组织，只有抽提到表达丰度最高的组织才更容易扩增到你的目的基因！
      因此我想楼主还是应该考虑这个重要的问题。
      祝试验顺利！

不好意思，最近实验忙，好久没来了，多谢大家的指导，实验证明楼上两位的知道完全正确，我开始用的是人睾丸组织CDNA，里面针对IL-1的丰富应该是很低的，后来我从外周血白细胞来提RNA反转录的，结果有扩出，有时自己遇到不太清楚的实验，我觉得在上面发贴求助是一种很好的方法，有高手指点。 非常感谢！

   恭喜恭喜，酷友通过求助使得自己试验顺利完成，这是每位genecool成员高兴得事情。也希望酷友能大力帮忙宣传，让我们的大家庭更加壮大！