小弟新手做PAGE,样品是真菌的酯酶同工酶粗提液. 问题一:重复电泳过程中,发现同工酶条带带数不稳定,最好一次5条(分子量最大的一条很亮很清晰,其余亮度不好,肉眼得细看);最差一次1条(亮度很高). 问题二:如果有师兄跑过真菌的酯酶同工酶的PAGE,请问分离胶浓度是多少? 问题三:小弟我跑PAGE一般16个小时(就是过夜啦),期间电压不变为什么电流越来越小呢?缓冲液上下槽的离子浓度有关么?而且16个小时才跑到整板的2/3处,如果我跑到底对条带有没有影响,会不会扩散(就是延长电泳时间)? 谢谢!!!

你的电压是多少啊

起始电压一般100V左右电流能达到20mA左右,但是随着电泳的时间增长电流在减小.所以我把电压又会加大以维持电流的稳定

一般不应该啊即使是15%的,你开到100V的话2个多小时也跑完了!缓冲液没问题吧!?

离子损失和胶的变化都造成电阻变化，所以电流会变小，电泳速度和电压相关（电压是动力），用电流来衡量，肯定是不对的 稳压电泳是恒速电泳，稳流电泳是加速电泳

想问下nano，用bio-rad的电泳槽进行SDS-PAGE的时候，一般我们都是80-120v电泳，但有时在电泳过程中电泳仪会自动报警并停止电泳，屏幕显示0W，是由于电流过小吗？

大象你好!! 我用的是甘氨酸-Tris缓冲液,能把您的电极缓冲液配方给小弟学习下么??谢谢 再问下: 1.电泳时间长短与凝胶的长短有关系么? 2.如何根据凝胶的长短设计电压呢? 3.我用的是垂直平板电泳槽,凝胶高度差不多30cm,百分之十的凝胶,正常电泳时间应该多 少? 急!!!

[quote user="nano"]离子损失和胶的变化都造成电阻变化，所以电流会变小，电泳速度和电压相关（电压是动力），用电流来衡量，肯定是不对的 稳压电泳是恒速电泳，稳流电泳是加速电泳[/quote] 如果我恒电压电泳的话,电流越来越小,对实验有什么影响么?

动力来自于电压，只要在通电，就在电泳，电流降低没有什么关系，反而恒流电泳，电压越来越高有时候容易造成拖带
纤夫：我不清楚具体的问题，但是我觉得有可能是短路造成仪器自动保护，显示0W不一定是仪器的具体问题，还有可能是接触不良，我没用过伯乐的电泳仪（可怜啊！），不清楚他仪器设置了些什么保护。六一的电泳仪也有类似问题，最后是仪器自动重启并保持在非工作状态

谢谢 NANO 十分感谢!!!