我用原核表达后的纯化蛋白免疫家兔，得到抗血清，现想用此抗体偶联乳胶颗粒（用碳化二亚胺法，因我手上有羧化的乳胶颗粒），请教：对抗血清要进行哪些纯化？用于包被的抗血清的要求是什么？碳化二亚胺法的操作步骤有那些？

我做过EDC偶联，只要在酸性条件下反应就行，推荐使用MES缓冲液，如果你想让EDC水解情况降低，可以用PBS系统，但同时也降低EDC的反应活性。另外，在反应体系中加入NHS（脂溶性）或磺酸化的NHS（水溶性）可以活化-NH2，使EDC反应活性大大加强

你可以在PIERCE公司网页上查到一些资料，我记得其网页上有个PROTEIN CROSS LINK GUIDE ，他们也出售各种偶联试剂，但是价钱比较昂贵

补充下，抗体最好是做特异性纯化，就是用固定化的抗原纯化特异抗体，这样你固定化做出来的胶粒，效价会比较高，相对非特异反应就很小了，PROTEIN A　G，蓝胶什么的，实际上都把抗体效价降低了，并没起到多少作用

1.        包被前取微粒（浓度大于20mg/ml，存在于纯水溶液中）.包被前用100mM MES（pH~6）缓冲液清洗1-2次。去除上清液，微粒待用。
2.        用100mM MES（pH~6） 缓冲液透析抗体两次（浓度需大于5mg/ml）。
3.        将抗体和约1% Tween-20加入到去除上清液的微粒中，并补充MES （pH~6）缓冲液（浓度：抗体：大于5mg/ml，微粒：25mg/ml）。
4.        超声混匀并室温震荡30分钟。
5.        加入 约1.2% 60mg/ml NHS和1.2% 100mg/ml EDAC。
6.        在室温震荡上述溶液2小时。
7.        加入20% 100mg/ml BSA溶液封闭，并在室温下震荡过夜。
8.        12000rpm 离心30分钟，用100mM MES（pH~6） 缓冲液清洗，再用测试缓冲液清洗（或者透析），建议清洗时进行超声波处理。
9.        用测试缓冲液配制微粒-抗体溶液调至所需浓度 (含表面活性剂及防腐剂)以备用。
  这是一步法交联基本程序。

对不起发错了

[ 本帖最后由 feiyun1001 于 07-11-6 13:12 编辑 ]

在葡萄糖异头碳上接上氨基的方法