带有GFP的质粒转染细胞后，通过荧光显微镜观察：大部分状态不好的细胞（可能细胞膜快破裂了）显示荧光，而那些状态很好的细胞不显示。
我想问一下荧光显微镜难道就是看那些快破裂的细胞么？ 如果不是的话，我分析是不是那些显示荧光的细胞是转入质粒后（转之前状态很好），随着质粒的复制发生破裂了？对细胞有毒性？
下图是普通光照

下图是绿光照片



对比后发现发荧光的都是些状态很差的细胞

不是很懂啊，请高手出招

以前偶转过一个融合表达的EGFP蛋白，结果就像LZ遇到的这样。然后是同样的转染系统，用单纯的EGFP质粒转染，效果颇佳。 如果LZ用的是融合表达的话，可能是跟EGFP相连的那个蛋白结构影响的原因。

我的不是融合表达,只是连接了一个GFP.

你说的情况一般是转染的毒性问题，因为转染对细胞还是一种异常的刺激，所以在荧光显微镜下经常能看到要死的细胞却是显示很强的荧光。我的理解是：一个是由于转染试剂本身的毒性，再一个由于大量表达外源蛋白质（即使是GFP也是一个27KD的外源蛋白），这都导致细胞生存能力的下降，如果不能耐受，就死掉了。 楼主是用悬浮细胞转染吗？我的经验是，悬浮细胞大多很难转染或转染效率较低。不知道你用什么方法和试剂进行转染。 你现在的问题我觉得是转染效率的问题，即活的细胞没看见荧光的存在。所以还是摸索一下转染的条件吧。

    同意纤夫兄的意见，其实昨天晚上我也在QQ上给楼主说了可能关于转染试剂细胞毒性问题，而关于转染效率的问题，我想可能与质粒本身的内毒素影响有关联。楼主说了他的质粒是手抽没有经过纯化去除内毒素的，因此在转染的过程中，肯定受到一定影响。正如纤夫兄所说，悬浮转染效率低，这是一个普遍的问题，最好是使用电穿孔仪来进行转染或者使用病毒载体。直接使用脂质体好像转染率始终上不去。

我的细胞是无血清悬浮的HEK293细胞,转染试剂是PEI. 可能是转染效率低下,转进去的细胞死了被我看见了. 呵呵 其他细胞没有转进去.

    車兄：是不是你的PEI还需要再作进一步的优化的阿，我所了解的PEI在25kDa时作用最好，而且一般低于6ug/ml的使用量对细胞的毒性仅仅不到20%的阿。呵呵我也准备做这个东西，不过转染的是DG44细胞，还要向你多学习的阿