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【求助】我的实验 pCEP4-GFP转染HEK-293细胞,转染效率低!


武林三国

【求助】我的实验 pCEP4-GFP转染HEK-293细胞,转染效率低!

pCEP4-GFP转染HEK-293细胞,PEI作为转染试剂。
质粒:PEI=1:2(m/m)
这是普通光照片,我的细胞密度很高(嘿嘿,悬浮细胞沉降后)

这是转染48小时之后的荧光照片(样品同上)


转染效率好低呀! 大家给想想办法吧!

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Re: 【求助】我的实验 pCEP4-GFP转染HEK-293细胞,转染效率低!

PEI是啥?脂质体转染试剂么?几个比例都是这样低的转染效率么?

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武林三国

Re: 【求助】我的实验 pCEP4-GFP转染HEK-293细胞,转染效率低!

    由于最近正涉及这个东西我就简单说说,不知道对楼主有没有帮助阿。
     先回答JACK兄:PEI是polyethylenimine,多聚乙烯亚胺的简写。它是一种阳离子多聚物,可浓缩DNA形成纳米级颗粒。这是由于它本身结构特点所决定的。PEI结构为每隔3个原子即出现一个氨基氮,这就构成了多聚网结构,因此能够与DNA结合。同时,PEI具有较强的缓冲能力,能够避免DNA在溶酶体的酸性条件下水解失活,因此具有较高的表达效价。PEI偶联上配体,通过受体介导的内吞途径既然靶细胞,可以显著增加转染效率和靶向后性。PEI作为转染试剂,其转染效果要好于其他脂质体类的转染试剂,但是其本身对细胞有一定毒性作用,而且不同的N/P值对转染效率影响很大,因此在使用过程中需要自行摸索并优化其作用的最佳条件。(N/P值指的是DNA/PEI复合物中PEI分子所含的N原子与DNA 分子中所含的P原子的摩尔比,一般1ugDNA含有3nmol的P原子)
      其次我再说说关于其PEI的一个优化条件。根据文献报道,DNA:PEI=1:2(w / w),12 well转染前细胞接种量大致在1*106cell / ml / well 。而关于PEI其品种有不同分子量大小的,一般根据他人的条件摸索得出在25kDa的PEI转染悬浮细胞效果最好。同时我们这里试验后发现N/P=8,转染液体积在1ml时所需PEI为1.2ul,DNA为5ug转染效率比较高。
      我们所使用的PEI为sigam公司购买的25kDa的PEI。

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Re: 【求助】我的实验 pCEP4-GFP转染HEK-293细胞,转染效率低!

呵呵!!更正一下,PEI是polyethylenimine,聚乙烯亚胺,不是聚乙酰亚胺。

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武林三国

Re: 【求助】我的实验 pCEP4-GFP转染HEK-293细胞,转染效率低!

哦就是就是,一下打错了,呵呵 車兄眼睛好犀利的阿!

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Re: 【求助】我的实验 pCEP4-GFP转染HEK-293细胞,转染效率低!

    我已经改正了。感谢車兄发现错误及时指出,希望大家都像車兄一样能够多多批评指正。呵呵

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武林三国

武汉哪个学校有pCEP4?

武汉哪个学校有pCEP4?

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我的PEI转染GFP

我的转染
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