将Kpn1和BamH1双酶切后的430bp的PCR产物连接到pRK415载体上后，提质粒双酶切鉴定的电泳图上总是带有很长的弥散状拖尾的东东！单用BamH1切能得到明亮清晰的一条带，而用Kpn1单切条带有拖尾。起初以为是Kpn1酶的问题，但换了酶再做还是一样！还有430bp的条带切下来特别淡，不注意几乎看不见，再加上有弥散拖尾，就更难看清了，郁闷。


附件里有图，哪位高手能否指点一下？谢谢了！

感觉还行啊，克隆应该没问题，pRK415如果是表达载体的话可以表达鉴定，直接往下做吧！是不是要发文章结果不好看呢，既然克隆出来了没必要为了这个胶耽误时间了，最重要的是最终实验的结果要好，比如产业化的东西要好，不然科研就没有意义了。其实拿到一个漂亮的胶有很多方法的。

呵呵，谢谢

  同意鹏程兄的意见，酶切接过弥散是很平常的问题，你可以适当减少你的 kpn I酶的用量试一试阿！

问下:MARKER是DNA2000么?

应该不是DL2000吧，DL2000的2000那条带与1000的带隔的有点远的！

有时候酶切拖尾和提的质粒质量的好坏也有关系，我在构建一个载体的时候，载体老是酶切拖尾我就每次冲提质粒，第三次的时候酶切就好了，还有如果你要的是目的片断的的话，切的剩余载体有弥散也不要紧，也可以减少酶切时间试试

楼主
　你好　
　　我急需你现在的ｐｒｋ４１５，能否购买或交换我有ｐｅｔ　ｐｕｃ１８　ｐｕｃ１９和ｄｈ５ａ　ｊｍ１０９
　
　　我的邮箱　ｒｅｎｈｅｊｕｎ＠１２６．ｃｏｍ
　ｑｑ　　４０６２３８５５９　
　　　　请您看到贴子后一定给我个回信　　急切等待

我这两天做酶切也遇到类似问题，后来延长了酶切时间，条带就比较清楚了。楼主可以试试。

怎么才能看到附件啊