1).从一个鸡蛋中能纯化多少IgY抗体,抗体的纯度如何?
每ml鸡蛋黄中有3-5mgIgY抗体。每个蛋中大约有60-100mgIgY抗体。一般特异抗体占总多克隆抗体的2-10%。用基本方法纯化的IgY抗体的纯度为75%。进一步(供选择,15分钟),用溶液B作第二次沉淀,使抗体的纯度达90%,抗体的得率无明显下降。
2).从鸡中产生抗体较兔中产生抗体有什么优点?
稳定的抗体来源
1个鸡蛋含有的抗体和1只兔中1次取血的抗体量相同。收蛋简单、温和。鸡一般1天下1个蛋,而兔却只能每2-3周抽1次血。
降低免疫程控
鸡只需作1个月的免疫程控,就可获得高滴度抗体。让兔产生高滴度抗体,免疫时间需2-3个月。
降低非特异结合
鸡的IgY不结合细菌和哺乳动物的Fc抗体。
对哺乳动物的抗原有效
由于鸟和哺乳动物在遗传上相差远,鸡在产生抗保守哺乳动物蛋白的抗体时非常有效。高度保守的哺乳动物蛋白在兔中不能引起免疫应答,但在鸟类中却可成功地得到抗这些蛋白的抗体
3).IgY抗体和从兔、山羊中产生的抗体有什么差别?
蛋黄IgY抗体是哺乳动物IgG抗体的180kDa同源物。适合于免疫印迹,ELISA和其它一般的免疫操作。