最近实验室里准备做鸡的IgY多抗的制备和提纯，比较头痛，这方面的文献资料也很少只能那这石头过河走一步算一步。有没有做过这方面试验的朋友，可以提点提点。偶现在才开始免疫，皮下大的重组蛋白（弗氏完全佐剂乳化），一切还都顺利，现在主要的麻烦在纯化IgY的问题上比较麻烦，大部分文献中介绍的水稀释法，偶试了一下，不太稳定虽然可以从卵黄中提出少量IgY但纯度生产，配合硫胺沉淀也不理想，顺便问一下一枚8ml的卵黄大概可以产多少mg的IgY啊？偶做的没有文献中说的那么多（文献说有9ml/ml），纯化条件还在摸索中，有进展偶会第一时间报上来的，有这方面经验的朋友欢迎指导交流啊！
附上IgY资料一篇

有问必答网上有人这么回答：

现在很多是用的水稀释法，之后用硫酸铵沉淀，但是以PEG代替硫酸盐沉淀，可进一步提高产量。Bade和Stegemann（1984）用预冷的丙烷和丙酮（－20℃）沉淀蛋白质并去除脂质，经DEAE柱层析进一步纯化，方法简便、省时。其IgY抗体活性与用Polson法提纯的IgY之间无明显差别。且稳定性好，经3次以上冻融，抗体活性未见改变。Hassl和Aspock用疏水交换层析和凝胶过滤二步法分离提纯IgY，虽然产量不及PEG或乙醇沉淀法，但活性相似，且纯度较高。IgY的进一步提纯可用提纯其它蛋白质的方法。常见的有凝胶过滤、DEAE纤维素阴离子交换柱层析和亲和层析等方法。必须指出，许多动物IgG均可用蛋白A亲和分离。但IgY不能与蛋白A结合。McCannel和Nakai（1990）用DEAE离子交换层析分离IgY亚群。在提高磷酸盐离子浓度的同时，始终维持一定的pH值。固相金属离子亲和层析是一种蛋白质纯化技术。最常用的金属离子有Cu²⁺、Ni²⁺，Co^2-、Zn²⁺。研究表明Fe³⁺离子与磷酸化氨基酸有很强的亲和力。结合于离子柱上的蛋白质常通过降低pH值或提高盐浓度或二者合并进行洗脱。Greene和Holt用固相金属离子（Fe³⁺）亲和层析，通过改变pH梯度，根据4个洗脱峰将IgY分为4个亚群。Marti等（1997）将重组蛋白抗原结合于Ni-NTA柱上，用免疫亲和层析纯化特异IgY，效果良好。Kim等用特异性IgY制成抗生物素蛋白质-酰化生物素系统的亲和层析柱，用于IgG的分离和提纯。用不同的提取方法所得的IgY分子量也各异。Bizhanov比较了氯仿、萄聚糖蓝(dextran blue,DB)和PEG三种提取IgY的方法，前者IgY产量比后二种方法高2～4倍；用SDS-PAGE分析其相应产物，发现DB法提纯获得三种主要的蛋白成份：34.7KDa、41KDa和66Kda，并含少量45Kda成份：氯仿法提取主要含两种蛋白成份：45.7KDa或75.2KDa；而用PEG提取获得以66KDa为主的蛋白成份，氯仿及PEG法提取的蛋白质中也包含少量41～80KDa的IgY。

没做过IgY，不过以前听别人讲过用硫酸铵沉淀加疏水柱（苯基琼脂糖凝胶）纯化效果不错。就是先用较高浓度硫酸铵把它挂到苯基琼脂糖凝胶上，然后降低浓度洗脱，找个合适的浓度洗下IgY。

另外，听说Amersham有专门纯化IgY的柱子，你可以了解一下。

丁香园的chromatography是这方面的专家，你可以和他交流一下，他也做过IgY的纯化。

谢了，楼上的，我在这块确实一点经验没有，前两天做做完水稀释后，用60％硫酸胺沉淀，结果离心后硫酸胺和目的蛋白是分开了，但目的蛋白不是沉淀在下面，而是在硫酸胺溶液的上面形成一次白色蛋白膜，我废了好大功夫才把它从硫酸胺里分出来（滤纸过滤），从电泳结果上看白色蛋白膜中含有IgY只是不纯，从来没遇见这样的是开来是得有高人提点一下啊！

我想用PEG法沉淀IgY，敢问一下应该使用分子量多大的PEG啊？6000or8000？

6000的吧

我是做igy的，我做过PEG 沉淀用的6000。效果不错，你把邮箱给我，我给你发点这方面的资料！

忘记告诉你了，我在小木虫上http://emuch.net/bbs/attachment.php?aid=369991发过我的帖子，你可以看看！我的邮箱是likewen159236@163.con