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【求助】能不能用保守序列了设计PCR引物啊


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1# 大 中 小 发表于 07-3-26 17:19  只看该作者

【求助】能不能用保守序列了设计PCR引物啊

       第一次做PCR（RT-PCR），还什么都不懂，我要做的是猪的细胞色素P450里的3A4亚型，但现在看文献和查NCBI都没有猪的3A4序列，只有人和牛的，想问问能不能通过对这两种动物的序列比较设计其引物呢，

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2# 大 中 小 发表于 07-3-26 18:22  只看该作者

Re: 【求助】能不能用保守序列了设计PCR引物啊

这个问题偶以前也没有遇到过。不过觉得你说的还是很有道理的。不妨在高度保守的序列中多合成几对引物。

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3# 大 中 小 发表于 07-3-27 09:13  只看该作者

Re: 【求助】能不能用保守序列了设计PCR引物啊

同意yoursosufo!

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4# 大 中 小 发表于 07-3-27 09:44  只看该作者

Re: 【求助】能不能用保守序列了设计PCR引物啊

哦，不好意思，我还想问问，我昨天看了人的3A4序列，有大概3万多个碱基，牛的也差不多有2万个碱基，我怎么样才能找到这里面的保守序列呢，我们实验室是第一次做PCR，自己又基本什么都不太懂，还请版主指教啊

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5# 大 中 小 发表于 07-3-27 13:55  只看该作者

Re: 【求助】能不能用保守序列了设计PCR引物啊

直接将人，牛等物种的序列输入clustal w，最好三个物种或以上。
然后run，在他们保守区域，设计简并引物。目的序列不要太长，最好设计巢式PCR
比如从20－800bp，设计一对，产物为780,然后在这个中间设计一对，比如200－600,产物为400bp，然后直接去p猪的cDNA，第一次产物，稀释一定倍数，做为第二次PCR模板，再p一次，如果两次产物大小都与你设想的差不多，就ok了

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6# 大 中 小 发表于 07-3-27 15:34  只看该作者

Re: 【求助】能不能用保守序列了设计PCR引物啊

水手是高手啊，我也学习了

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7# 大 中 小 发表于 07-3-28 08:55  只看该作者

Re: 【求助】能不能用保守序列了设计PCR引物啊

水手分析具体,不错!

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8# 大 中 小 发表于 07-4-8 23:45  只看该作者

Re: 【求助】能不能用保守序列了设计PCR引物啊

要做多久才能有所谓的经验呢，什么都不懂，郁闷中……

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9# 大 中 小 发表于 07-4-9 09:08  只看该作者

Re: 【求助】能不能用保守序列了设计PCR引物啊

时间来证明,快了.....

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10# 大 中 小 发表于 08-3-17 13:23  只看该作者

求助

怎么样对已克隆的植物抗病基因的产物进行比较和分类，它们具有一些共同的结构域：NBS?

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