提高质粒pMC73A在宿主细菌中的稳定性研究
耐氨固氮菌是将含有改变了启动子的nifA基因的质粒pMC73A引入固氮菌而构建成的工程菌。质粒pMC73A在宿主细菌中是不稳定的。连续传代试验结果表明了：在宿主细菌连续繁殖过程中，质粒pMC73A随宿主细菌的繁殖而发生缺失。当宿主细菌繁殖至70代时，质粒pMC73A缺失超过50%；宿主细菌繁殖约120代时，质粒pMC73A的缺失几乎近100%。而在谷芽接种、盆栽试验及田间试验的结果表明：在无选择压力条件下的自然环境中，质粒pMC73A在植株接种14天后，在根际的缺失率近100%，而在叶面存活5~8天后，质粒pMC73A的缺失率亦达 100%。为了提高质粒pMC73A在宿主细菌中的稳定性，用PCR方法，将广宿主范围质粒PK2中控制稳定性的片段parDE克隆到pMD18-T载体上，然后插入到质粒pMC73A的BamHI位点上，得到质粒pXY-2并转化到E.coli中验证其遗传稳定性。通过三亲交配将质粒pXY-2导入原宿主细菌中。与质粒pMC73A比较，质粒pXY-2在宿主细菌繁殖100~200代后，其质粒含有100%。
