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【求助】PCR模板结构复杂怎么办？


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11# 大 中 小 发表于 07-6-9 11:30  只看该作者
武林三国

Re: 【求助】PCR模板结构复杂怎么办？

大家好！这个实验我已经做出来了，不同处： 1. PCR体系用的是rTaq酶 配2xGC buffer，以前用的是买rTaq酶带的普通buffer； 2.条件94度 10’； 94 度 50'' 60度 50'' 72度 2’ 25循环，以前的退火温度是55度

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12# 大 中 小 发表于 07-6-9 18:03  只看该作者

Re: 【求助】PCR模板结构复杂怎么办？

1，从你的结果来看，你的GC含量看来果然比较高； 2，退火温度的提高PCR成功，可能是由于你的引物不是很好，错配的熵值很高。提高退火温度减少了错配。

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13# 大 中 小 发表于 07-6-10 19:06  只看该作者
武林三国

Re: 【求助】PCR模板结构复杂怎么办？

从测序的结果来看,引物是和模板目的地方完全褡裢的,并没有出现错配,但至于为什么要那么高的退火温度,还不是很清楚,难道就是因为GC含量高?

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