金免疫测定技术
金免疫测定技术是指对体液中抗原、抗体含量定量测定的技术，包括斑点金免疫渗滤试验和金免疫层析试验。
一．斑点金免疫渗滤试验
1．原理
斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold filtration assay,DIGFA)是将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素薄膜上（这种固相载体具有过滤性能）制成抗原或抗体包被的微孔滤膜并贴置于吸水材料上，依次在膜上滴加标本、免疫金、及洗涤液等试剂并与硝纤膜上的相应抗体或抗原发生反应，过量试剂很快渗入吸水材料中。抗原抗体反应后，形成大分子胶体金复合物，从而使阳性结果在膜上呈现红色斑点。
液体通过微孔滤膜时，渗滤液中的抗原或抗体与膜上的抗体或抗原相接触，起到亲和层析的浓缩，达到快速检测的目的（一般在5分钟左右完成），同时洗涤液的渗入在短时间内即可达到彻底洗涤目的，简化了操作步骤，达到简便的目的,成为“床边检验(point of care test,POCT)”主要方法之一。本方法除试验盒本身外，不需要任何仪器设备。
2．方法类型
1）双抗体夹心法测抗原
用抗体结合在微孔滤膜中央，滴加待检标本，若标本中待测抗原则与膜上抗体结合，然后滴加金标抗体，加洗涤液洗涤后，阳性者即在膜中央呈红色斑点（胶体金聚集）。
2）间接法测特异性抗体
用抗原包被在微孔滤膜上，滴加待测标本，滴加洗涤液洗涤后, 滴加金标抗抗体，加洗涤液洗涤后，阳性者即在膜中央呈红色斑点（胶体金聚集）。该法由于血清标本中非目的IgG的干扰,易导致假阳性结果,临床上较少用。
3．实验材料
本法临床上均有现成试剂盒供应，试剂盒主要组成有(图-1)：①滴金反应板 胶体金免疫渗滤试验中主要试剂成分之一，由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或抗体的醋酸纤维素膜片三部分组成。②胶体金标记物 ③洗涤液 ④抗原参照品或抗体阳性对照品。
4．技术要点
1）将反应板平放于实验台面上，于小孔内滴加含待测抗原标本1-2滴，待完全渗入，与膜上的抗体反应而结合在膜上。
2）于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1-2滴，待完全渗入，使胶体金标记抗体与结合在膜上抗原反应。
3）于小孔内滴加洗涤液2-3滴，待完全渗入，洗去未结合的胶体金标记抗体。
4）结果观察 在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点显示者判为阳性反应，反之则为阴性反应。斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。
二．金免疫层析实验
1．原理
金免疫层析试验（dot immunogold chromatographic assay，DICA）是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术结合的以微孔滤膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。本项技是将各种反应试剂分点固定在试纸条上，检测标本加在试纸条的一端，通过毛细血管作用使样品溶液在层析材料上泳动，样本中的待测物与层析材料中的反应试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），通过标记免疫技术显色。本项技术的特点是可进行单份标本检测且简便、快速、不需任何仪器设备，因此，发展非常迅速。
2.方法学类型
DICA多用于检测抗原，但亦可用于检测抗体。常见方法学类型有：
1)双抗体夹心法测抗原：
若图-2所示，G处为金标抗体(免疫金)，T处包被抗体，C处包被抗金标抗体，B处为吸水纸。测试时A端滴加待测标本，通过层析作用，待测标本向B端移动，流经G处时将金标抗体复溶，若待测标本中含待测抗原，即形成金标抗体-抗原复合物，移至T区时，形成金标抗体-抗原-抗体复合物，金标抗体被固定下来，在T区显示红色线条，呈阳性反应，多余的金标记抗体移至C区被抗金标抗体捕获，呈现红色质控线条。
2）竞争法测小分子抗原：
若图1-3所示,G处为金标抗体，T处包被标准抗原，C处包被抗免疫金抗体，测试时待测标本加于A端，若待测标本中含有待测抗原，流经G处时结合金标抗体，当混合物移至T处时，因无足够游离的金标抗体与膜上标准抗原结合，T处无棕红色线条出现，实验结果为阳性，游离金标抗体或金标抗体复合物流经C处，与该处的抗金标抗体结合出现棕红色的质控带，若标本中不含待测抗原，金标抗体则与T处膜上的标准抗原结合，在T处出现棕红色的线条，实验结果为阴性。
3）间接法测抗体：
为了消除待测血清标本中大量的非特异性IgG与特异性IgG竞争结合金标记抗人IgG，降低了试验敏感性，胶体金间接免疫层析法测抗体常设计成反流免疫层析法。
测试卡分成可左右折叠的两部分，右面中央纵向贴有NC膜条为膜上包被有抗原线T，E处为与蛋白结合的有色染料，F处吸水材料；左面中央开有观察窗口B，C处固定有金标记羊抗人抗体，A、D处为吸水材料。测定时先将缓冲液加在D处层析至C处使金标物复溶，然后将标本加在E处使其与染料一起在膜的层析作用下向F端移动，若标本中有待测抗体存在，则与膜上抗原结合形成抗原抗体复合物，待有色染料延伸至膜上标记线G处时，在F处加缓冲液，合上测试卡，A的强大吸水作用使膜上液体反向流动，标本中非特异性IgG及无关物被洗回E处，随后而来的金标羊抗人抗体与抗原抗体复合物结合，出现棕红色线条。无棕红色线条出现则表明血清中无特异性抗体。该法有效地排除了非特异性抗体对测试的干扰。
3．实验材料
临床上有现成试剂盒供应，试剂盒主要成分为胶体金层析条，所用试剂全部为干试剂，它们被组合在一试剂条上(如图15-2)，试剂条的底板为单面胶塑料片,层析条为多孔聚乙烯、硝酸纤维素、玻璃纤维素材料，A、B两端粘贴吸水性强的滤纸等材料。G为干燥固定在玻璃纤维膜等材料上的胶体金结合物。T为粘附有已知的抗体或抗原，C处粘附有质控品(抗免疫金抗体)，T、C点物质往往以直线的形式包被在膜上。
4．技术要点
实验操作非常简单 其操作要点为：
1）将试剂条标记线一端浸入待测标本中2-5秒或在标本加样处加一定量待检标本，平放于水平桌面上。
2）5-20分钟内观察结果。
3）结果判断：阴性：出现一条棕红线质控条带，阳性：出现两条棕红线条带，试剂失效：无棕红线条带出现。
三．临床应用及评价
1．本法具有操作简便、快捷以及操作人员不需技术培训，无需特殊仪器设备，试剂稳定，便于保存等特点，因此特别符合“床边检验”项目要求。
2．本法灵敏度不及酶标法和酶发光免疫测定法，在临床应用中应引起高度重视。
3．该技术不能准确定量，只能作为定性或半定量试验，目前主要应用于正常体液中不存在的物质（如传染病抗原和抗体以及毒品类药物等）和正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质（如HCG等）的检测。
