电化学发光免疫测定技术
一．原理
电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay, ECLI)是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般化学发光（CL）不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。用化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+标记抗体，通过抗原抗体反应和磁颗粒分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度的大小对带测的抗原或抗体进行定量或定性。
二．技术类型
1.分离方法 磁颗粒分离技术
2.免疫学反应模式 其反应模式与酶发光免疫测定技术相同，主要也有双抗体夹心
法、双抗原夹心法和固相抗原竞争法三种主要模式，所不同的只是相应标记抗原或抗体
上标记的是三联吡啶钌而不是酶。
三．技术要点
1．常用的实验材料
1）三联吡啶钌的标记物：通过三联吡啶钌的N羟基琥珀酰胺酯（NHS）将其与抗原或抗体连接，制成三联吡啶钌标记物。
2）免疫磁珠：可将抗原或抗体直接或通过生物素-亲和素系统包被在磁珠颗粒上，制成免疫磁珠。
3）三丙胺溶液。
4）定标液和质控液。
2．双抗体夹心法检测抗原，其主要步骤为：
1）三联吡啶钌标记抗体和生物素标记抗体与待测标本同时加入一个反应杯中孵育反应。
2）将链霉亲和素包被磁珠加入反应杯中，再次孵育，使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。
3）蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)3]2+-抗体-抗原-抗体-生物素-链霉亲和素-磁珠复合体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的抗体（与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体）也被吸出测量室。
4）蠕动泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。
5）最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。
四．方法学评价
1．标记物的再循环利用，使发光强度更高、时间更长、易于测定。
2．具有灵敏度高，可达pg/ml水平;线性范围宽;反应时间短;试剂稳定好等特点
图4 电化学发光免疫测定技术反应原理
