说说我的问题吧,最近是在p一条2.3kb的带,模板用的链霉菌的总DNA,退火温度在61℃时能出现目标带,但是很浅,降到60.5℃时有两条带,升到62℃又没带,而且每次都能看到很亮的引物带,现在就想能弄亮点回收
试剂用量见下:
引物:4ul,上下各两微升
dntp:4ul
DMSO:4ul
模板(链霉菌总DNA):2ul
buffer:5ul
taq酶:2ul
98℃:4min 然后是95℃:1min,61℃:40s,72℃:2’30‘’,循环三十轮,再72℃:10mi
大家能不能给我找找原因啊?