今天可算是没怎么干事，早上跑了个电泳，把昨天酶切鉴定的东西悉数看了看，替师姐做的那两管竟然什么都没有，自己的倒是都对了，只是那个没有切出来的依旧且不出来，引物上的酶切位点凭空就没了，真是郁闷！
        跑TAE的结果倒是比较好，两个连接体系挑了十管，一个全对，一个对了两管，于是都提取了质粒，接下来做了酶切鉴定！呵呵，过两天就要接合转移了，配了点溶液，顺手转化了两个质粒，明天摇起来，后天就转移，忙起来了！
        心情还不错，实验成功率大为提高，信心也越来越足了，理论方面还欠缺了点，得多看点资料和书才行了！下周还有该死的考试，都没怎么听过课的，唉唉，还是得费点功夫应付这个啦！

好好好羡慕哦，考到中科院去了，加油哦，基因可不是说做就做的了，我们班的大试验，且不出来的就占了半数，谢谢搂主分享哦，会一直关注的了。

挺好的，很少关注别人的日记，总觉得不大好，今天来过感觉还不错，嗬嗬！ 搂住继续！

楼主好久没有来了，大家都很忙，我现在也是，如果有时间常来啊， 这里还有你的牵挂。还有惦记你的酷友们。

今天是这个学期第一次上站，回来之后事情太多，试验进展不顺，生活也遇到了不少烦心事，所以一直没有什么心情去回顾或者展望什么！不过还好，终于所有的阴霾都散去了，一切仿佛又开始变得明朗起来！ 这个学期主要还是借助上年留下来的尾巴在做，两个敲除的实验有一个已经成功接合转移，挑双交换的过程中！另外一个转了三次了还是没有转进去，用的POJ260作载体，效率果然低的很！换PKC1139，却是怎么也不能成功构建，搞了两个多月了，真的快崩溃了，四片段老是弄得乱七八糟，也绕了不少弯子，中间倒是发现了自己当初设计的不成熟，不过路走到了这一步，已经没有什么办法回头修改了，最终还是决定分步连接，采取迂回战术算了！ 下学期就要转博了，时间紧得很，感觉自己时间花了，可是效果还是没到。也很想把课题做得深入一些，但是文献还没完全弄透，事情还是急不来的！ 前几天和老板谈了一下，稍微说了自己的想法。目标清楚了，可是具体的细节是不太明白。我做的代谢工程，老板说是先构建一株突变体，然后把其他表达的基因互补进去，选择不同的融合位点，看效果如何！这些都明白，可是既然有失活得，那互补那段不就是直接替换失活的那段序列吗？为什么还要选择？这个又如何选择呢？还是一个大问号，看来还得好好看文献了！ 本来打算在三月把去年的尾巴结束的，现在看来可能得到五月才能搞定了。没关系，好好努力就好了，一切都会好起来的！

支持楼主！每个人的实验生活都有苦有乐，但是总会看到希望的呵呵~~~加油！

今天回收载体时发现载体好象有问题，多克隆位点上双酶切竟然切出了两条带，载体是自己构建得，昨天酶切鉴定没错，要用了竟然就出问题了，回头看了看前面的记录，最有可能得是其中一个酶可能有问题，回收了一下大的片断，又重新切了十微升，晚上再跑电泳！ 接着铺了两块平板，挑双交换，这个玩意是我最不喜欢得实验，用长的牙签，一个单克隆还得分成两半，一半放载体抗性平板上，一半放在插入抗性平板上，眼睛都盯黑了，才挑了103个点，弄好了，搁37℃下培养，希望这次能顺利吧！ 下午组会，也没上去了，将昨天做好的接合转移的平板拿出来加盖了抗生素，放在超净台里吹着就在一旁睡着了。太累了，昨晚一点多睡得，今早不到七点就起了，中午也没休息，本想眯一下，一不小心就睡过去了，再醒来他们组会恰好开完，收拾好平板，接着转化，现在真的是抓紧一分一秒了，想在五一前有个确切的结果，不拼也不行了！ 明天生活依旧，gf正找工作，还得时不时替她留意一些事情，可能也正是最艰苦的时段吧，熬过去了就会好起来的！

[quote user="希望在未来"] 今天是这个学期第一次上站，回来之后事情太多，试验进展不顺，生活也遇到了不少烦心事，所以一直没有什么心情去回顾或者展望什么！不过还好，终于所有的阴霾都散去了，一切仿佛又开始变得明朗起来！
这个学期主要还是借助上年留下来的尾巴在做，两个敲除的实验有一个已经成功接合转移，挑双交换的过程中！另外一个转了三次了还是没有转进去，用的POJ260作载体，效率果然低的很！换PKC1139，却是怎么也不能成功构建，搞了两个多月了，真的快崩溃了，四片段老是弄得乱七八糟，也绕了不少弯子，中间倒是发现了自己当初设计的不成熟，不过路走到了这一步，已经没有什么办法回头修改了，最终还是决定分步连接，采取迂回战术算了！
下学期就要转博了，时间紧得很，感觉自己时间花了，可是效果还是没到。也很想把课题做得深入一些，但是文献还没完全弄透，事情还是急不来的！
前几天和老板谈了一下，稍微说了自己的想法。目标清楚了，可是具体的细节是不太明白。我做的代谢工程，老板说是先构建一株突变体，然后把其他表达的基因互补进去，选择不同的融合位点，看效果如何！这些都明白，可是既然有失活得，那互补那段不就是直接替换失活的那段序列吗？为什么还要选择？这个又如何选择呢？还是一个大问号，看来还得好好看文献了！
本来打算在三月把去年的尾巴结束的，现在看来可能得到五月才能搞定了。没关系，好好努力就好了，一切都会好起来的！[/quote]
常来坐坐，这里有想你的酷友，有热情的心！
抬头看看天空，依旧蔚蓝，阴霾只是暂时的，一切都会好起来的！

我今天向师姐们打听了我实验的做法，突然很头疼，是那种真的头疼，看着楼主的日记，觉得大家都是那么过来的，心里还舒服点。。。看来这行真是不好干啊！！回宿舍睡会觉看能不能好点。。。祝：实验顺利！

手头的三条途径终于都快结束了，这段日子忙得还算满足，也很久没来了，忙是借口，关键还是有点懒惰，呵呵！ 今天做接合转移，正在等大肠杆菌摇到适当浓度，ET12567就是难长，都六七个小时了，OD值还没到，孢子早活化了，就等这个，真是无聊！ 前面的突变株今天刚做完杂交，结果得晚上才能看了，希望不要让我失望！ 回首过来的日子，虽然暂时还没什么成就，但进步还是相当明显了，也算是一种欣慰吧！ 老婆得工作还没搞定，久这点让人忧心得很，还好她自己不怎么着急，希望五月结束前有好消息吧！