第一，琼脂糖的选择，一般的片段500bp－5kb对质量没有太大的要求，1kb左右的片段很多品牌的回收率都可以达到80％以上，越大越小回收率都会下降。如果样品量很小，或者需要较大的回收率，那么选择高质量（纯度）的琼脂糖是非常必要的。如果你想回收大片段采用β-Agarase会得到很好的效果。
第二：割胶，很自然胶越小回收率越高，切胶时应尽量除去多余的胶块，怕损失一点样品割胶太多反而会降低回收率。注意：虽然割胶重要，但是不应操作时间太长，紫外照射太多会损伤DNA，对利用AT来克隆PCR产物更是致命的。
第三，让然要让胶完全溶解啦！溶液量也要适合
第四，就是过柱了，过柱前加入三分一体积的异丙醇，这对提高回收率有很大的帮助的，（这是我最爱步骤了）大家可以试试啊！为了提高回收率还可以将流出液重复再过一次。流出液可以暂时保存直到确认已经回收到再丢弃。
第五。就是洗脱了，将洗脱液加到柱子后，延长时间10分钟以上，提高温度到37度，重复洗脱一次，都可以提高回收效率。

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加异丙醇对后续的酶切没有影响吗？

不错 简练实用

加异丙醇有什么依据吗？会不会对目的条带造成不良影响？麻烦楼主解答一下！