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[其他] 请问:为什么质粒用脂质体转染细胞,转染不进去??



请问:为什么质粒用脂质体转染细胞,转染不进去??

请问:为什么质粒用脂质体转染细胞,转染不进去??                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        我用的质粒是8000bp的质粒,是PCDNA3.1 不知道带不带荧光,接的目的片段是TRPM8基因 ,用脂质体转染,脂质体是invitrogen的脂质体2000.转染时两者比例是质粒:脂质体=4ug:10ul。但是转进去6h后换液,然后每隔6h拍照,看不见任何荧光。不知道为什么??我做了一个已知有荧光的质粒做对照的,这个质粒以前转染,转染的进去,也可以看到荧光。但是这一次,这个已知有荧光的质粒也什么都看不到。不知道是不是没有转进去。也不知道为什么没有转染进去??请高手分析原因。谢谢!

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PCDNA3.1载体没有荧光标签的,除非你用的载体是人为加入了荧光标签。你先看看是不是这个载体的问题。
生命诚可贵,实验价更高。

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我也不知道有没有荧光。这里有图谱,请帮忙看下

这是质粒信息的图谱,是invitrogen的PCDNA3.1
我不认识上面接没有接荧光。请帮忙看一下
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这个不是PCDNA3.1,而是PCDNA3,有区别哦,呵呵。
不过不管是哪个,都没有荧光标签的,我们实验室用过的。就象我上面说的,除非对质粒进行过改造,否则是肯定没有荧光标签的。
生命诚可贵,实验价更高。

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是否成功转染用RT-PCR和WB鉴定
千万不要PM我问问题,因为我只是来做俯卧撑的。

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一步步排除,看看是转染的哪一步出了错,没道理转染不进去,转染以后培养细胞,然后荧光显微镜下或pcr进行验证即可、

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