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载体构建

本主题由 gene℃ 于 08-9-4 07:59 移动 

载体构建

各位大虾好.我是位新手,刚进实验室,准备做载体构建.是用BamhI和SalI双酶切,用PBI121做空载体,不知道切出来是两个多大的片段,哪位有PBI121的质粒图谱,我急用,先谢谢大家了

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为什么用SalI呢?我查了下,PBI121里没SalI位点哦!

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不会吧,那我也能切出来两个片段,而且师兄也用相同的酶切PBI121,已经构建成功了

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pBI121全序列登陆号:AY781296
我这里的Clontech的图谱给的酶切位点不全.

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这条路不光通向成功!

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回复 2# 热血酷友 的帖子

pBI121载体有很多是后来改造过的,含有SalI位点。

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回复 1# 新新酷友 的帖子

这是Genecool上一位大侠的。二者大同小异,楼主可以参考一下。

[ 本帖最后由 rkrl001 于 08-9-22 15:47 编辑 ]
附件: 您所在的用户组无法下载或查看附件

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谢谢大家的热心帮助,是的,我们所用的PBI121是经过改造的,大小约13KB,.现在能够切开,但是老是连不是上,也不知道到底是哪里出了问题.

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回复 7# 热血酷友 的帖子

想做菌落PCR,能直接用35s启动子和NOS终止子做引物吗?
还是用35s启动子和我的特意性引物,或则NOS终止子和特意性引物扩呀
用35s启动子和NOS终止子做引物时,那退火温度设置为多少?请大虾指点,急用

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回复 7# 热血酷友 的帖子

请问下,我用菌落做的PCR有杂带,是怎么回事呀?
请各位大侠指点,急用!!!!!!!

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