载体构建

1^# 大中小发表于 08-9-3 17:47 只看该作者

载体构建

各位大虾好．我是位新手，刚进实验室，准备做载体构建．是用ＢamhＩ和ＳalＩ双酶切，用ＰＢＩ１２１做空载体，不知道切出来是两个多大的片段，哪位有ＰＢＩ１２１的质粒图谱，我急用，先谢谢大家了

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梦羽

2^# 大中小发表于 08-9-5 20:03 只看该作者

为什么用ＳalＩ呢？我查了下，ＰＢＩ１２１里没ＳalＩ位点哦！

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3^# 大中小发表于 08-9-22 11:44 只看该作者

不会吧,那我也能切出来两个片段,而且师兄也用相同的酶切PBI121,已经构建成功了

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梦羽

4^# 大中小发表于 08-9-22 12:25 只看该作者

pBI121全序列登陆号:AY781296
我这里的Clontech的图谱给的酶切位点不全.

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shuanhu2007
Rank: 5

铁血酷友

5^# 大中小发表于 08-9-22 14:31 只看该作者

http://bbs.genecool.com/viewthre ... sdata=42%7C%7C14855
他这有！

这条路不光通向成功！

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rkrl001

6^# 大中小发表于 08-9-22 15:40 只看该作者

回复 2# 热血酷友的帖子

pBI121载体有很多是后来改造过的，含有SalI位点。

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rkrl001

7^# 大中小发表于 08-9-22 15:43 只看该作者

回复 1# 新新酷友的帖子

这是Genecool上一位大侠的。二者大同小异，楼主可以参考一下。

[ 本帖最后由 rkrl001 于 08-9-22 15:47 编辑 ]

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8^# 大中小发表于 08-9-24 16:52 只看该作者

谢谢大家的热心帮助,是的,我们所用的PBI121是经过改造的,大小约13KB,.现在能够切开,但是老是连不是上,也不知道到底是哪里出了问题.

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9^# 大中小发表于 08-9-26 17:22 只看该作者

回复 7# 热血酷友的帖子

想做菌落PCR,能直接用35s启动子和NOS终止子做引物吗?
还是用35s启动子和我的特意性引物,或则NOS终止子和特意性引物扩呀
用35s启动子和NOS终止子做引物时,那退火温度设置为多少?请大虾指点,急用

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