每种细菌都有自己独有的保藏方法，短期和长期保藏的培养基各个不同，希望各位酷友能把自己知道的各种常见食源性细菌的详细保藏方法发布出来，互为补充，取长补短。

1.蜡样芽胞杆菌
（1）短期保藏
1）接种蜡样芽胞杆菌于营养琼脂斜面，并于30-35℃培养24±2h
2）在室温条件下（21-23℃）继续保持1-2d，以便于芽胞完全生成
3）在4℃条件下冷藏肉汤培养物
（2）长期保藏
1)将蜡样芽胞杆菌接种于营养琼脂斜面，在30-35℃培养24±2h
2）在室温条件下（21-23℃）继续保持1-2d，以便于芽胞完全生成
3）为了延缓细菌的生长，可以用蒸馏水与20%的甘油氯化钠溶液按1+1混合以后加到琼脂斜面上。
制备甘油氯化钠溶液：溶解4.2g的氯化钠，并加入蒸馏水，使体积达到800ml。在溶液中加入12.4g的无水磷酸氢二钾和200ml甘油。调整PH至7.2，121℃，灭菌5min
4）将3ml1+1的混合液迅速放入干冰中或超低温冷冻箱内进行冷冻，温度设定在-55—-90℃
5）每两年传代一次
2.空肠弯曲杆菌
所有的培养过程必须使用微需氧的空气环境：氮气占85%，二氧化碳占10%，氧气占5%
（1）短期保藏
1)接种与装有10ml酸水解酪素-酵母浸膏-氯化钠肉汤的试管中
配制方法：20g酸水解酪素（casamino acid)，6g酵母浸膏，2.5g氯化钠和8.71g无水磷酸氢二钾，补足蒸馏水至1L，121℃，15min灭菌。调整PH，使其在灭菌后为8.5±0.2.
2）将接种过的培养基在41~44℃培养48±2h
3）在巧克力琼脂或血琼脂斜面上进行划线，41~44℃培养48±2h
4）每周进行传代
（2）长期保藏
1）接种于装有10ml酸水解酪素-酵母浸膏-氯化钠肉汤的试管中，于41~44℃培养48±2h
2）在培养物内加入甘油，使最终浓度达到10~20%
3）分装2~3ml，于-70℃或更低温度进行冷冻
4）每6个月传代一次

3.肉毒梭菌
（1）短期保藏
1）接种于脱气后的装有疱肉培养基或含胰蛋白酶的胰酪胨-蛋白胨-葡萄糖-酵母浸膏肉汤（trypticase-glucose-yeast broth,TPGYT)的试管中，根据不同菌株选择26℃或35℃培养，26℃适于蛋白水解的A/B/F和G群，而35℃适于非蛋白水解的B/E和F群。
制备疱肉培养基：在12.5g市售培养基内加入100ml冷却的蒸馏水，混合后保持15min，以使里面所有的颗粒都能湿透。另一种办法是分装1.25g市售培养基到20mm×150mm的试管内，加入10ml凉的蒸馏水，混合均匀，使所有颗粒都浸透。121℃，灭菌20min，最终PH为7.2±0.2
TPGYT培养基无法买到，须用各种不同的原料自己配制。配制过程是在1L蒸馏水内溶解以下原料：50g胰酪胨，20g酵母浸膏，5g蛋白胨，4g葡萄糖和1g硫乙醇酸钠。分装15ml到20mm×150mm试管内，121℃灭菌10min，最终的PH为7.0±0.2。冷藏灭菌后的培养基，在使用之前加入胰蛋白酶（trypsin）。
制作胰蛋白酶溶液：将1.5g的胰蛋白酶（1+250，Difco）加入100ml蒸馏水中。搅拌水中的胰蛋白酶使其悬起，让颗粒沉淀，用0.45μm的滤膜过滤上清液。使用之前蒸煮上述基础液10min，排出溶解氮。在每15ml基础液里加入1ml胰蛋白酶溶液。
2）根据培养细菌所要求的温度，培养5d或更长时间。
3）在4℃可保存6个月。
（2）长期保藏
1）按上述方法培养细菌
2）用无菌的离心管盛TPGYT培养物离心，沉淀细菌芽胞。
3）用10ml~20ml无菌蒸馏水冲洗细菌芽胞两次。
4）用无菌蒸馏水重悬洗过的芽胞，将其储存于4℃。
5）细菌芽胞悬液能稳定保存10~20年。

4.产气荚膜梭菌
（1）短期保藏
1）试管内装入10ml新脱气过的液体硫乙醇酸盐肉汤，接种入产气荚膜梭菌，在35~37℃厌氧条件下培养18~20h。
2）再将细菌接种于脱气后的疱肉培养基，在35~37℃有氧条件下培养24±2h。
3）在室温环境（21~23℃）再培养1~2d，使芽胞充分形成。
4）在4℃条件下冷藏肉汤培养物
5）每30天进行传代。
（2）长期保藏
1）接种产气荚膜梭菌到胰酪胨-蛋白胨-葡萄糖-酵母浸膏肉汤培养基。
配制方法：将50.0g胰酪胨，5.0g蛋白胨，20g酵母浸膏，4g葡萄糖，5g磷酸氢二钠和1g硫乙醇酸钠溶解到1L蒸馏水中。调整PH为7.3±0.2，分装15ml到20mm×150mm的试管内，121℃，灭菌8min。使用之前将灭菌后的培养基冷藏保存。
2）将接种过的培养基于35~37℃培养18h。
3）按1+1的量将肉汤培养物加入到脱脂奶中，取1~2ml进行冻干。或者按1+1的量将肉汤培养物加入到10%甘油氯化钠溶液中。甘油氯化钠溶液的制备：溶解4.2g氯化钠到900ml蒸馏水中，然后加入12.2g无水磷酸氢二钾，4g无水磷酸二氢钾和100ml甘油。调整PH到7.2±0.2，然后在121℃，灭菌15min。
4）取1~3ml1+1的培养物混合物，放入固体干冰中和超低温冰箱中保存，温度为-55~-90℃。
5）每两年传代一次。
5.大肠杆菌
（1）短期保藏
1）将细菌接种到脑心浸液琼脂斜面，于35℃培养24±2h。
2）在4℃冷藏斜面培养物。
3）每月进行传代。
（2）长期保藏
1）将细菌接种到脑心浸液琼脂斜面，于35℃培养24±2h。
2）将上述培养物接种到10ml脑心浸液中。
3）进行培养，培养温度为35℃，时间为24±2h。
4）离心培养液，然后用10ml巴氏磷酸盐缓冲液冲洗细胞两遍。
5）用10ml巴氏磷酸盐缓冲液重悬细胞。
6）在一份冲洗过的细胞悬浮液里加入一份双料脱脂牛奶。脱脂牛奶是用200g脱脂奶粉加入1L蒸馏水，然后在121℃下高压15min后制得。
7）将上步所获得的混合物分装成1~2ml，进行冻干处理。
8）可在室温（21~23℃）条件下保存4~5年。

6.单核细胞增生李斯特氏菌
（1）短期保藏
1）接种细菌于10ml含0.6%酵母浸膏的胰酪大豆肉汤或10ml胰蛋白磷酸盐肉汤。
2）于30~35℃培养48±2h。
3）再接种入含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂或营养琼脂斜面。
4）于30~35℃培养48±2h
5）4℃冷藏斜面培养物
6）每个月进行一次传代。
（2）长期保藏
1）接种细菌于10ml含0.6%酵母浸膏的胰酪大豆肉汤或10ml胰蛋白磷酸盐肉汤。
2）于30~35℃培养48±2h
3）在肉汤培养物内加入甘油使最终浓度达到10%
4）分装成2~3ml，在-70℃或更低温度进行冷冻
5）每6个月传代一次
7.沙门氏菌
（1）短期保藏
1）将细菌接种于脑心浸液琼脂斜面，于35℃培养24±2h
2）将培养物置于室温（21~23℃），避光环境
3）每两个星期传代一次
（2）长期保藏
保藏沙门氏菌不建议使用冻干法，因为细菌的鞭毛和菌体抗原可能会因此遭到破坏
1）将菌种接种到血琼脂斜面，于35℃条件下培养24±2h
2）用无菌接种环（1μl）在斜面的表面收集培养物
3）将收集到的培养物接种到装有半固体胰酪胨琼脂培养基（不加酚红）的试管中。制作此培养基的方法：溶解20g胰酪胨和3.5g琼脂到1L水中。分装1~2ml到10mm×75mm带金属箔片盖的试管内。将试管于116~118℃灭菌15min。冷却后，在无菌条件下用软木塞封好试管口。软木塞应该事先浸泡在煮沸的石蜡里5min
4）接种好的试管于35℃培养24±2h
5）培养物在室温（21~23℃）避光处保存
6）每3年进行一次传代
8.志贺氏菌
与大肠杆菌相同