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[载体构建] pet28a的标签大小


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1# 大 中 小 发表于 08-8-28 19:00  只看该作者

pet28a的标签大小

今天在进行蛋白的电泳的时候，偶然谈到PET28a的his标签大小的问题。有人说是3kd，有人说是3.5或者3.6的样子。但是我怎么看都看不出上面的两种情况。我就想问一下，它的标签是从什么地方开始到什么地方结束的？
虫二本无意，风月自无边！

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2# 大 中 小 发表于 08-8-29 08:27  只看该作者
先看看pet28a的图谱：
http://bbs.genecool.com/viewthre ... amp;page=1#pid47254

完整的标签应该是从Met开始，到End结束。如果要精确计算的话，PET28a表达出来的融合蛋白所带的标签大小要根据你的克隆位点来算，如果是用Nco1和Xho1进行克隆的话，标签是最小的，而且只有下游有his；如果用Nco1和Xho1两者之间其他位点进行克隆的话，得到的标签则要稍大一些，而且是上下游都有his. 具体分子量是多少，根据克隆后载体余下的氨基酸计算一下就行。
生命诚可贵，实验价更高。

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3# 大 中 小 发表于 08-8-29 11:03  只看该作者
如果我在我的目的片段上加上终止密码子的话，后面的his标签还会表达出来吗？比如我用EcoRI和XhoI的酶切位点，我在XhoI酶切位点前面加上终止子TAA的话，后面的标签会不会就不会表达出来了？
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4# 大 中 小 发表于 08-8-29 11:09  只看该作者
当然不会表达，其实表达框与我们平常所说的ORF是一样的，
因为pET28a是有两个表达HIS框，但一般都只会用其中一个。
至于表达蛋白大小的理论值分析可以将ORF到一些网站进行相关分析。
如http://expasy.org/tools/peptide-mass.html;
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  • 纤夫 威望 +1 积极参与 08-8-29 12:15

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5# 大 中 小 发表于 08-8-29 11:21  只看该作者
谢谢两位版主的回答。我明白了
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6# 大 中 小 发表于 08-9-1 17:22  只看该作者
明白就好，呵呵
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