哪位大侠帮我分析下这个图啊
我目的片段大小26KD
载体是PGEX-6P-1
下面是我诱导完跑的电泳图
不知道出来没有
先谢了啊

你诱导的上样量太大,不好判断了,不如把诱导的减少一半跑个电泳看看了
不过看26KD是有带的,应该表达了,就是最粗的那一团,不过GST tag本身的大小也差不多吧,
怎么你的目的带是26?

怀疑你这个没有连上去，目的片段26的话，加上GST tag应该有53KD 了，这张图看不出有表达，或表达很低。

目的蛋白26

引用:

原帖由 qiuyu_zhang 于 08-8-20 10:49 发表
目的蛋白26

仔细考虑下你是否是融合表达，融合蛋白分子量到底多大

应该是属于融合蛋白吧
我目的26加上载体26大小应该在52左右才对吧
但是我做wb
也是在26左右才有特异性结合。

引用:

原帖由 qiuyu_zhang 于 08-8-22 10:30 发表
应该是属于融合蛋白吧
我目的26加上载体26大小应该在52左右才对吧
但是我做wb
也是在26左右才有特异性结合。

你用的一抗是？你既然知道是52KDa，为什么要说是26呢？跑一块清楚点的胶看看吧，你上面那块胶浓度太大了，52KDa跑8-10%足够了，要看空载体对照跑12%的

我这块就是12%得胶，对照都有了啊，虽然知道是52，但是这26得这条带，其它地也没有啊，我的一抗用得是阳性血清，1：2000稀释得，应该没有问题啊。

血清做出来的结果不足以说明问题，这里还不说你制备血清时用的抗原是什么。血清里的抗体，顶多有5%是特异性的，还分别对应若干种抗原决定簇，而且一般都是大肠杆菌表达蛋白制备的，同一个系统的产物影响更大
另外，你空载体对照诱导了吗，没看到任何表达产物啊，没诱导拿来做对照是没意义的

空载体作对照了啊，而且是一起诱导得啊。条件是一样得啊。