各位酷友：
      我近日将一插入1.4Kb外源基因的pET-21与pET-30质粒分别转入大肠杆菌DH5a中，在对平板上长出的菌落进行菌液PCR时，菌液PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果均有1.4kb左右大小的目的条带，而且几乎每次均有目的条带，由于前一段时间的菌落PCR出带的很少，由此我产生怀疑，于是昨天顺便做了一次空白菌液PCR：dNTP、上游引物、下游引物、Taq酶、Taq酶buffer的种类与用量均未变化，只是将模板用等量的双蒸水代替，PCR的温度与时间都未做改变，结果PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果也有与目的条带大小相仿的条带，起初以为是双蒸水被污染了，换了干净的双蒸水结果还是一样,作为刚进实验室的新手实在找不出其他的原因，请各位高手给予指点！

这个是不是可以说明你中间的一个或多个药品遭到污染了？
也有可能是PCR 的LOADING BUFFER污染了

[ 本帖最后由 kay0205 于 08-8-1 19:48 编辑 ]

看起来像是PCR体系中的一个或多个试剂被污染，其中以Taq最不容易发现，建议更换整套体系，重新进行验证试验