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real-time PCR退火温度的取舍？


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1# 大 中 小 发表于 08-7-31 14:52  只看该作者

real-time PCR退火温度的取舍？

大家好！我昨天做了一下两个基因的退火温度条件摸索，结果如下图：
1、两次PCR退火温度分别为57度、58度，其他条件一致
2、57度时基因A的最终荧光值大于2500 B基因在1500左右
3、58度是基因A的最终荧光值1483，B基因1821
4、从溶解曲线看58度时较平稳
5、退火温度如何取舍好？A基因在退火温度提高后最终荧光值下降；B基因则提高；且两者溶解曲线变的平稳（是否可以理解为背景较小？）
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2# 大 中 小 发表于 08-7-31 19:22  只看该作者
请大家帮忙分析一下呀！
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3# 大 中 小 发表于 08-8-2 01:50  只看该作者
没有人愿意回答吗？？？？？？？
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4# 大 中 小 发表于 08-8-2 02:14  只看该作者
寄希望于热心的人能看到，这个是今天做的B基因阴性对照结果
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5# 大 中 小 发表于 08-8-2 09:58  只看该作者
没做过，我们都看不懂，希望有经验的人给你建议！

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