大家好！
我用的是申能博彩的K717试剂盒，提的是睡莲和海兽根部的生物膜的DNA，第一次做了6个样，结果跑电泳只跑出来4个，第二次和第三次做了12个样，结果只跑出来2个，今天做了6个样，干脆一个都没跑出来，但是有拖带。我是在搞不清问题出在哪里了，照理说试剂盒很好提的吧。

以下是我的步骤，也是说明书的步骤，请大家帮我看看问题到底出在哪里，谢谢

1.样品准备：样品取100mg用200ul Solution SUS将样品浸泡、悬浮, 使样品软化分散开。
2.加入400ul Solution LYS，300mg石英沙，在旋涡振荡器上高速剧烈振荡，30分钟。
3.用台式离心机，12,000转/分，室温离心5分钟。
4.将上清完全转移到无菌1.5ml离心管中，加入120ul Solution BID，盖上离心管盖，上下颠倒混匀。将溶液用1ml TIP全部转移到3S柱内，柱子放入2ml离心管中，不盖离心管盖，室温放置5分钟以上。
5.盖上离心管盖，12,000转/分，室温离心1分钟。
6.将取下3S柱，弃去离心管中的废液。将柱子放回同一根离心管中，加入600µl Wash Solution, 10,000转/分，室温离心1分钟。
7.重复步骤6一次。
8.取下3S柱，弃去离心管中的全部废液。将柱子放回同一根离心管中，10,000转/分，室温离心2分钟，以除去残留的Wash Solution。
9.洗脱：在柱子中央加入30µlTE（已预热到40度）, 将柱子放入新的干净1.5 ml离心管中，室温放置2分钟。12,000转/分，室温离心1分钟。收集管中的液体即为基因组DNA。

这是我的步骤，我实在想不出来我那步做的不对了，或者哪个重要的细节我忽略了，请大家赐教！感激不尽！

我的试剂盒是刚买的，应该不会有什么问题吧
我也怀疑我的电泳，我用的是1XTAE，都是用2次就换新的，这大夏天的跑电泳发现跑完了缓冲液都热了，我查了点资料说温度应该小于30度，4度-30度，于是我就把整个电泳槽放到4度冰箱里电泳了，电压也比较低70V，跑了50分钟，发现12个样还是只跑出来2个，但是其他的也有点拖尾，但是没有亮带，
     是不是提出来的DNA的量太少啊，所以跑的看不出来？

我觉得跑电泳没必要拿到冰箱里去跑吧，我们平时跑都是在外面啊，也一样会有蒸汽，不过低温确实会好一点就是了。你提DNA的时候会不会温度太高，把DNA都破坏了？你应该考虑在震荡那步不让它太剧烈，或者把温度降下来，最好能冰浴研磨。先试试这步吧，如果不行再想别的办法。

哦，对了，还有一点，你的样品也可能太少。你试着把样品量加大一点。

引用:

原帖由 北者南缘 于 08-7-31 09:47 发表
哦，对了，还有一点，你的样品也可能太少。你试着把样品量加大一点。

说的好！！！！！！！
我觉得这点非常重要！！！！
我下午多弄点样试试看！！！
非常感谢这位高手同志！！！