最近做RT-PCR扩病毒时，扩增的片段与预期值不一致，我实验了好几个地方的材料，要不扩不出来，只要扩出来的片段都一样大，都是与预期值差200BP左右，又用兼并引物扩PVY的，目的片段还是差200左右。各位有谁知道问题所在的，请多多指教。

如果不是非特异扩增的话，应该是你自己设计上是不是有问题，引物特异性不够好
最好能搞个阳性对照，或者换别的位置的引物
也可以把扩增片段酶切检测一下

我用的是特异的引物，只有扩PVY时用的兼并引物，是不是我CDNA合成时有问题，各位能否把你们+SSRNA 病毒合成CDNA的条件告诉一下 。