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[其它PCR疑难问题] 求助，为什么我跑出带不清晰。


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1# 大 中 小 发表于 08-7-27 16:47  只看该作者

求助，为什么我跑出带不清晰。

我是做的荞麦遗传多样性。
我用荞麦的嫩叶提取的DNA，然后用引物跑，可是每次跑出来的都是不清晰。还有的就是有几个品种扩的带少。每管加的东西都是一样的。EB染色有10分钟。上样量为8ul。胶的浓度为2%。
是因为我的模板不干净吗？还是什么原因。急急

[ 本帖最后由 阿嚏520 于 08-7-27 16:52 编辑 ]
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2# 大 中 小 发表于 08-7-27 20:12  只看该作者
引物会不会不特异？提高退火温度试试。

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3# 大 中 小 发表于 08-7-27 21:14  只看该作者
引物特异性不够啊,可能基因的保守性较差.
另外,我发现你的胶都跑得好深啊,可以长了点时间啊,
不过你们的照像机好清晰啊!

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4# 大 中 小 发表于 08-7-27 21:48  只看该作者
我通常都跑1个小时，用100V跑。跑的时间长了吗？
是不是要缩短电泳时间好点？

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5# 大 中 小 发表于 08-7-27 22:55  只看该作者
嘻嘻,不用啊
其实跑过胶板的1/2左右就可以收了,但是也没坏啊,

可不过浪费时间啊!

我平时20分钟就完了,电压100-130V都试过,都可以,
但若要拍照电压低点好,!

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6# 大 中 小 发表于 08-7-27 22:56  只看该作者
其实你的模板浓度可能高了点啊,

你应该要稀释一下!
本帖最近评分记录
  • hyde 威望 +1 辛苦了 08-8-3 22:07

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7# 大 中 小 发表于 08-7-28 10:19  只看该作者
唉，我都愁死了。以前也稀释过，还是不很清晰。真的不知道什么原因啊.
谁给个清晰的带给参考下啊

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8# 大 中 小 发表于 08-8-3 18:41  只看该作者
还是不清晰，有的就只是出来一条带，是什么原因？
高手快来啊

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9# 大 中 小 发表于 08-9-28 18:12  只看该作者

个人意见

我觉得是不是跑的时间太长了，我通常跑到胶的一半多一点就停了。还有，可以再降低点电压。胶的浓度很大，电压减小一点比较合适（90v），或者降低胶浓度（1.2%）
不知道

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