你的情况我以前经常遇到。嘿嘿
非主流的植物RNA 提取经常会遇到什么都提不出来的情况。呵呵。
这种情况主要是由于recalcitrant 植物组织中的核酸不能被guanidine thiocyanate抽提出来的原因。
植物和动物不一样，很多情况下是不可使用guanidine thiocyanate的。
告诉你一个偷懒的办法，直接使用CTAB提DNA的buffer。也就是Tris 和CATB。除非特别的recalcitrant的样品，都可以一起提出来RNA。然后再使用DNAse切掉DNA，或者用3M sodium acetate pH5 水饱和酚再抽一次。上清沉下来就是RNA了。
还有一个偷懒的办法。购买invitrogen的plant RNA isolation reagent。
注意。不是Trizol！ 也不是基于guanidine thiocyanate的kit！这是绝对不能成功的——除了arabidopsis和RICE。plant RNA isolation reagent这个东西里面没有guanidine thiocyanate，只有NP40 mercaptoethanol和EDTA.这个配方是专门针对植物的。
如果你想省钱的同时提高质量的RNA，你可以参考我前阵子发表的一个文章。注意，由于没有guanidine thiocyanate，你要非常小心防止RNAse。
最简单的简化版本protocol直接就是 100mM Tris （pH 8），20％mercaptoethanol。磨叶子直接酚抽。上清乙醇沉淀。80％以上的植物均可以成功。比提plasmid还简单。而且质量还过得去。足够做RT－PCR.
我文章中提到的其他步骤均可省略。但是如果多糖多，如豆种子，那么silica没有办法节省。否则均可直接用乙醇沉淀上清。
Ding L-W., Sun Q-Y., Wang Z-Y., Sun Y-B., Xu Z.F. , (2008), Using silica particles to isolate total RNA from plant tissues recalcitrant to extraction in guanidine thiocyanate. Analytical Biochemistry 374(2): 426-428
祝顺利。
Ding L-W 中山大学
zipy001@gmail.com
