我现在做的是蛋白表达，用的载体是pET-28a,在大肠肝菌BL21（DE3)中表达。
请教一个问题：我在纯化过程中，是利用NI柱进行蛋白纯化的，所以我想通过测培养细菌的量来知道里面蛋白的含量（粗蛋白），因为知道蛋白含量和NI的结合能力就可以知道饱和度，我知道有个公式来计算的（已经细菌OD600来计算蛋白含量），但是现在记不起来了，请问有谁知道，谢谢了。

OD600只可大致估算大肠杆菌浓度，估算蛋白浓度太不准确
计算填料饱和度也不能这样去算，填料结合能力只在某个特定条件下有意义，因此也只能估算饱和度。算蛋白质的质量也不能说明实际结合效率，因为结合效率和蛋白质含HIS丰度有关，你不能说结合同样质量20KDa的蛋白和40KDa蛋白效率一致，且实际上也不是2倍关系

你说的我都明白,我只需要通过OD600大概估计计算出粗蛋白的量,然后根据NI的结合能力,适当超饱和度的添加NI,再加摸少许条件就可定型了.
如果现在什么都不知道,只是随意取样,添加添加NI进行实验是没办法完成的.

你的试验不应该这样设计，为什么不先做一次试下？跑电泳看上柱前和穿漏中目的蛋白的变化再决定每次用上多少样。在没有实际操作的前提下这样去做计划是没有多大意义的，目标蛋白与填料的结合还有许多干扰因素，每个表达菌株都会有不同现象，目标蛋白丰度很高又很容易结合的话，怎么都好做，表达量低就难做，吸附杂蛋白多，这样的话你又如何去计算填料用量？这些都要靠实际操作后的跑胶看效果才能做调整，不能纸上谈兵
而且，如果你想得到比较纯且比较多的收得率，应该用过量的蛋白去饱和填料而不是你说的“适当超饱和度的添加NI”，只有填料吸附饱满才好设计下面洗脱的工艺