请教各位兄弟，pET载体的a、b、c、d在表达上各有什么优点么？

pET载体的a、b、c、d的主区别并不是在于表达水平啊,而是在于一些酶切位和一些标签位置的不一样.

因为他们其他部分都是一样,如启动子,ORI, 载体主要序列都基本是一样的,区别就是标签的多少,有些两端都有,有些在前,有些在后;另外酶切位是明显不一样的;在做实验前应当对载体的信息要有充分理解.

这个问题pET表达手册上说的很明白。

原文如下：
“pET 载体最初由 Studier 及其同事构建(Studier and Moffatt, 1986; Rosenberg et al., 1987; Studier et al., 1990)。 Novagen 开发的系列新 pET 载体则使目的蛋白的克隆、检测以及纯化更加容易。载体大致可分为两大类：转录载体和翻译载体。  
•   转录载体用以表达本身带有原核核糖体结合位点和 AUG 起始密码子的目的基因。只有3 种转录载体：pET -21(+)、pET -24(+)和 pET-23(+)。  
•   翻译载体包括来自T7 噬菌体主要衣壳蛋白的高效核糖体结合位点，用于表达那些不带有核糖体结合位点的目的基因。翻译载体的详细信息请参考 pET 载体特点一览表(第 7页)。

   翻译载体在命名上与转录载体不同，多一个字母后缀，例如 pET-21a(+)，表示相对于 BamH I 克隆位点识别序列GGATCC 的阅读框。所有带后缀 a 的载体从GGA 三联密码子开始表达，带 b 的从GAT 开始，带c 的从BamH I 识别序列ATC 三联密码子开始。带 d 后缀的载体阅读框和带 c 的一样，不同的是它们有一个上游 Nco I 克隆位点而非 Nde I 位点以便直接将目的基因克隆到AUG 起始密码子。”

个人经验总结，一般来说最好用a系列载体，因为
（1）不需要添加碱基对阅读框进行调整，一旦pET载体不能用，可以直接连接到其他载体上例如pQE载体，而不需要重新设计引物。
（2）如果使用b,c,d载体的BamHI及其后边的几个酶切位点，要特别当心，因为要在目的基因的Met氨基酸和酶切位点之间添加1个氨基酸，这个氨基酸可能会对目的蛋白的活性产生很大的影响，尤其是当目的蛋白的N端完全保守时，可能会导致目的蛋白完全没有活性。



不过b系列载体也有自己的优点，例如很多自带信号肽的载体，可以进行分泌表达的都是b系列的，例如pET20b,22b,25b等。

载体大致可分为两大类：转录载体和翻译载体。
• 转录载体用以表达本身带有原核核糖体结合位点和AUG 起始密码子的目的基因。只有3 种转录载体：pET -21(+)、pET -24(+)和pET-23(+)。
• 翻译载体包括来自T7 噬菌体主要衣壳蛋白的高效核糖体结合位点，用于表达那些不带有核糖体结合位点的目的基因。翻译载体在命名上与转录载体不同，多一个字母后缀，例如pET-21a(+)，表示相对于BamH I 克隆位点识别序列GGATCC 的阅读框。所有带后缀a 的载体从GGA三联密码子开始表达，带b 的从GAT 开始，带c 的从BamH I 识别序列ATC三联密码子开始。带d 后缀的载体阅读框和带c 的一样，不同的是它们有一个上游Nco I 克隆位点而非Nde I 位点以便直接将目的基因克隆到AUG起始密码子。

学到了不少东西，谢谢朋友们～！

受益匪浅呐！

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学习了，最近正做这个呢

真的是学到了不少东西啊