各位大侠，我做的是酵母双杂交。
在构建的诱饵质粒和文库融合后，看到三叶草结构，并在三缺，4缺培养基中长出共200个左右的单克隆。
在x-α-gal平板上划线后，变蓝的质粒挑菌在一缺液体培养基中摇了4天左右。酸化玻璃珠法提取了酵母质粒，测得浓度为4ug/ul。
问题出现了，酵母质粒电转化入DH5α感受态，在加了AMP的LB中摇过夜，摇得挺浓。但是提质粒总也提不出（跑琼脂糖凝胶没有条带，分别用试剂盒和碱裂解法提质粒）。测了浓度只有0.06ug/ul。怀疑是感受态的问题，但重复了三次电转，每次都重新做感受态，总是这样的结果。到底哪里出了问题，是我的质粒活性不好在感受态中不能增殖？我该怎么做呢？各位大侠有什么想法帮我出出主意吧，本人在此感激不尽。

可以将你的提取酵母质粒的方法贴上来吗？我也正在做酵母双杂，酵母中的质粒提不出来，很着急，也可发在我的邮箱里biolicui@yahoo.com.cn
谢谢！！

提取酵母质粒遇到问题，可以和我沟通，再这里三言两语可能说不清楚
QQ 904165226
4ug/ul,我不知道你怎么测的，个人感觉酵母的质粒达不到这个浓度，我提取酵母的质粒，跑电泳都看不到带。在转化DH5以后，我才能确定是否提取出了质粒。
大肠杆菌转化失败，我个人的经验，最大的可能就是质粒不对。
因为大家作感受太的操作，我觉得都已经非常成熟了，不会有问题的。所以，我怀疑楼上的没能提取出质粒，最大的问题处在酵母质粒的提取上。我不知道你的问题是否解决了，如果还存在的话，我们讨论一下。

[ 本帖最后由 haiwuya 于 08-7-7 16:43 编辑 ]

哈哈，时间控制好，温度控制好

不知道以上问题解决了吗？
有问题，我们可以继续深入讨论！

有空能不能把酵母质粒的提取给发一下 我正在做酵母QQ 893540312