还可以采用菌落裂解电泳的方法直接挑取重组子。一般目的片段如果不是很小，空载体和重组载体比较容易区分的话，都可以采用这种方法。 将菌落培养时间稍微延长，挑取半个菌落加入裂解液中，同时挑取蓝斑（如非兰白斑，直接取空载体质粒）作为对照，电泳即可区分。 这个方法有现成的试剂盒，也可以自己配制。

我以前都是把菌挑到LB液培，摇3.4个小时，然后取一些出来沸煮后再加1ul菌液做模板， 看了大家的讨论后，觉得确实没必要再煮了，浪费时间，个人感觉三生的方法比较方便高效，但是还是担心有污染问题，实验室有很多菌，就怕污染了相同抗性的菌株。 将一个阳性菌落挑到2mlLB中，正常的话大肠杆菌3.4个小时还是长的比较好了。

[quote user="Jack"]

将菌落培养时间稍微延长，挑取半个菌落加入裂解液中，同时挑取蓝斑（如非兰白斑，直接取空载体质粒）作为对照，电泳即可区分。

这个方法有现成的试剂盒，也可以自己配制。[/quote]

半个菌落裂解电泳能看得到吗？会不会量太少啊

我最近也在做这个东东，没有用沸煮，直接加2微升菌液，然后上9700pcr，可以扩出东西来的，呵呵。。。在这里学了不少哦

引用:

原帖由 有幸三生 于 06-11-15 10:20 发表
[quote user="有幸三生"]完全不必要额外煮沸。 只需要挑取少许克隆，在配好的PCR反应液中涮几下，然后用正常的PCR反应程序即可。因为在PCR第一个循环94°变性的步骤中（正常设置为4-5min即可），质粒或基因组肯定有释放，也足够P ...

这位朋友太厉害了，肯定是PCR的高手。我们都是小角色，还没长大。谢谢你的贡献！

不用煮沸，在你的PCR程序的第一步（预变性94°C五分钟）时，长时间高温就使细胞壁破壁了，所以煮沸是完全没有必要的

直接一点点就可以做了,不需要另外处理.

十分支持第三点。。。。