[quote user="有幸三生"]

小宝 wrote:

你的方法很独到，值得借鉴。  有幸三生 wrote: 1. 沾有菌落的牙签在PCR反应液中涮过之后，还可以直接扔到LB培养基中用来接种 不过，这样接种会不会有污染啊。

问题不大，重组质粒一般都含抗性的

[/quote]
谢谢！我知道了。

我们做菌落PCR无须额外煮沸,事实证明结果不错!

是啊，我做菌液PCR一般就是摇了8－9个小时直接加2UL，没用加沸啊，也都做出来了

又学了招偷懒的方法，现在对实验偷懒的方法特别感兴趣。。

[quote user="taogongyou"]是啊，我做菌液PCR一般就是摇了8－9个小时直接加2UL，没用加沸啊，也都做出来了[/quote]

 

试了一下，效果果然不错！

 

下次试下用牙签涮pcr反应液方法，这个似乎更简单，呵呵

我现在这些方法都不用了，都是用枪头挑取半个菌落，加入MIX(除了模板其他的都有），平板放入培养箱继续培养。等PCR结果出来了，直接挑取阳性克隆摇菌

我是摇3－4小时，加3ul菌液，边摇，边做PCR，等PCR出来，也差不多能知道该不该提质粒了

[quote user="raulcoco"]我是摇3－4小时，加3ul菌液，边摇，边做PCR，等PCR出来，也差不多能知道该不该提质粒了[/quote]

 

有点不太明白，您说的“3ul菌液”是指3ul LB的菌液，也就是把克隆直接接种到LB之后所形成的菌液，这样子是不是细菌的浓度太低了。还有，3—4小时能开始提取质粒了吗？您的细菌长的很快？

[quote user="raulcoco"]我是摇3－4小时，加3ul菌液，边摇，边做PCR，等PCR出来，也差不多能知道该不该提质粒了[/quote]

 

有点不太明白，您说的“3ul菌液”是指3ul LB的菌液，也就是把克隆直接接种到LB之后所形成的菌液，这样子是不是细菌的浓度太低了。还有，3—4小时能开始提取质粒了吗？您的细菌长的很快？

这个帖子讨论的好啊，如果每个求助贴都能够如此讨论，论坛发展指日可待