[quote user="有幸三生"]完全不必要额外煮沸。
只需要挑取少许克隆，在配好的PCR反应液中涮几下，然后用正常的PCR反应程序即可。因为在PCR第一个循环94°变性的步骤中（正常设置为4-5min即可），质粒或基因组肯定有释放，也足够PCR反应的模板用量了，这个我每天都在做，还没有做不出的时候。[/quote]
补充几点如下：
1. 沾有菌落的牙签在PCR反应液中涮过之后，还可以直接扔到LB培养基中用来接种
2. 在做菌落PCR的时候，每次都要做阴性、阳性对照，阳性对照可以用抽提好的质粒或基因组，这样可以确定PCR主反应液的配制没有问题，不会因为菌落PCR阴性而怀疑PCR的反应；阴性对照加一点水或者什么都不加，这样可以帮助识别PCR反应是否有假阳性产生的可能；如果偷懒的话，阴性对照可以不做，但阳性对照则是必须要做的
3. 再告诉大家一个偷懒的菌落PCR鉴定的方法：按照每次反应15-20 ul的体系计算好PCR各反应组分的量/次，然后一次性配制100次或50次反应的量，做成Ready-to-use的PCR主反应液（除Primers、Taq酶不加，模板用的是菌落），每次做菌落PCR的时候，只需要根据反应的个数，吸取相应的PCR主反应液，补加相应的Primers、Taq酶，再分装即可。这样的好处有二：即开即用，节省时间；另外反应组分均一，可减少实验批次之间的误差。
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