我的一个目的基因载入pET-30a载体中后转化到BL21中诱导表达 有新表达条带产生 新产生的蛋白主要存在于包涵体中 其表达条带大小比预测的小了4、5KD 我的表达测序读码框都正确 后来将基因序列分析一下 发现其中含有六组稀有密码子 都是AGG  中间都有序列间隔开 我猜测是否因为稀有密码子的原因造成翻译提前终止 因为BL21本来就是一个蛋白缺陷型菌株 于是我便将我以前转入BL21菌株的菌液提了质粒 对这个菌液我做了菌液PCR验证 扩增出了自己的目的片断 因为曾经这个菌液同样的质粒已经测过序 所以这里偷懒了一下 并未测序 认为其正确 将这个质粒转入到Rosetta菌株中，如果前面表达片断与预测略小是因为稀有密码子的原因，那么这次转入Rosetta中就应当表达出更大的片断 但令人郁闷的是用Rosetta表达量特别小 根本不像是诱导出了大量的目的蛋白 但确实又有新条带产生 且要比前面转入BL21的要大一些 但还是要比预测的略小 我现在十分困扰 有点摸不清头绪了 希望我的问题还有讲清楚 如果有人碰到类似经历或者能提供些建议 我不胜感激！！！！！

[ 本帖最后由 hjjdiudiuapple 于 08-6-13 20:05 编辑 ]

Rosetta菌株表达量一般情况下是比BL21(DE3)小，至于蛋白质大小，本来你就觉得是小了4-5KDa，现在觉得变大了点，但又不足理论值，这个很可能是SDS-PAGE的误差。建议继续优化下发酵条件，看能否提高表达量

谢谢你啊 我以为Rosetta菌株增大了tRNA丰度就应该表达量增大呢 加上师兄用Rosetta诱导的量特别大~ 我调整下试试 可能真和条件有关

hjjdiudiuapple您好：
我最近表达蛋白遇到了和你一样的问题，表达的蛋白分子量比预期的要小4-5KD，后经分析发现含5个稀有密码子，我查了一下Rosetta菌株可以弥补这个缺陷，但目前我们实验室没有这个菌株，可以帮助一下吗？不胜感激！

我原来用BL21和BL21-DE3,基本看不到表达
换Rosetta后,超表达,但是问题来了,包涵体和上清表达的都没有活性,空欢喜一场
只好准备做真核表达了

版主，对含稀有密码子基因的表达，Rosetta一般应该比BL21高吧。
楼上的，只换宿主有时候不行，就要考虑换不同启动子的表达载体。