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[其他] 关于大肠杆菌的热击转化,90秒,45秒,30秒?



关于大肠杆菌的热击转化,90秒,45秒,30秒?

我们都用90秒,但最近看原核表达手册中文版时上面说是30秒?而stratagene的BL21的操作手册上给的是45秒?是菌种不同吗

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热击原理不是很清除,一般认为是热休克和热胀冷缩的过程,
菌种只是决定热击时间的一个方面,其他的包括离心管的厚度、菌液的体积、转入片段的大小等,一般的我们用90秒处理,对于不同的菌种也有30S,45S 的,还有的包括37度5分钟,等等。
另外,过长时间的热击会导致转化效率答幅度下降,
亲爱的甘荻丽娜
我终将远行
风帆扬起,迷雾散尽

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回复 1# 的帖子

是菌种的不同!
现在感受态细胞不同的公司有不同的菌种,所以它们热击时的时间也不同的。我就用过45s的。这个无所谓的,但是是自己做的话还是用经典的90s。

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we use 90s!!

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谢谢大家

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对于大肠杆菌要严格要求是90s,绝对不能高于这个温度
这条路不光通向成功!

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对于大肠杆菌我们用的都是90秒,效果挺好的

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我们用的42度45秒,不过我经常没及时拿出,以至于60秒,都不错.

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呵呵,我們實驗室是用42度45秒,有時會很好,有時也很差,這和所做的感受態細胞有關吧!我們是自己做感受態的!

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呵呵,一般情况下,相信大家的实验都不会再热击上出问题的
亲爱的甘荻丽娜
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