各位老师，小弟在做产气荚膜梭菌类毒素提取纯化，将灭活后的菌液用硫酸铵提取，但发现加到60%以上才出现上浮物，而且添加过程中未见沉淀，上浮物是一些很粘稠的糊装物，据说就是毒素还有菌体，我们的培养液中只有蛋白胨、酵母侵粉、葡萄糖、糊精和一些微量的维生素，我的问题是1、蛋白出现上浮是否正常？（毒素分子量大概40000，等电点不知道），2、需要分级纯化蛋白吗？希望能得到各位老师的指点，

不清楚你说的类毒素是蛋白么。


硫酸铵沉淀的话，沉淀出现的浓度与蛋白本身的浓度有关，所以如果不知道你的起始的总蛋白浓度，光知道一个硫酸铵浓度没太大意义，如果蛋白很稀，自然需要很高的浓度来沉降。

你可以把各浓度沉淀下来的组分去跑SDS-PAGE来看看自己要的东西在哪个范围内。

我个人经验，硫酸铵中的蛋白沉淀应该是白色的细小粉末状晶体。当然会有一些淡黄到深黄色的糊状东西，个人认为应该是一些类脂和多糖的混合物。

我做的是大生产，工艺比较粗糙些，就象师兄说的是类脂和多糖的混合物，蛋白总浓度大概在10mg/ml，有4-12种蛋白都是一些有毒性的物质，其中也有类脂和脂多糖，我就是不明白，加大浓度后为什么会上浮？蛋白会上浮吗？不是在沉淀中吗？这个和破伤风抗毒素有些相似的地方，上浮的糊状物是很好的免疫原，主要就是用这个来生产疫苗，谢谢楼上师兄的指点！

加大浓度后，溶液的密度会增高阿，超过那些沉淀的密度，沉淀就会上浮。就像死海中，人不会淹死一样。

不过饱和硫酸铵溶液密度只有1.235g/ml，一般来说蛋白都应该是沉淀。上浮的话，应该是有密度较低的杂质。

[ 本帖最后由 tangboyun 于 08-6-12 16:03 编辑 ]