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合成的葡萄糖基本培养基(SD)
SD是含有盐类、微量元素、维生素、氮源(不含氨基酸的酵母氮碱)和葡萄糖的合成基本培养基。
不含氨基酸酵母氮源(见CM配方说明) 6.7g
葡萄糖 20g
细菌培养用琼脂 20g
加水 ~1000ml
用于酵母的X-gal指示平板
因为在SD培养基的正常酸性pH条件下,5—溴—4—氯—3—吲哚—p—D—半乳糖苷(X—gal<!>)对酵母菌不起作用,故使用中性pH的培养基。这种选择完全是一种权宜之计。因为许多酵母菌株在中性pH时生长不好。为配制每升X-gal指示平板,需制备下述溶液。
溶液I
10×磷酸缓冲液贮存液 100ml
1000×无机盐贮存液(见下面配方) 1ml
drop-out混合物(见上述) 2g
如果培养基中含有葡萄糖,用蒸馏水调节体积至450ml;若培养基中含有半乳糖,用蒸馏水调节体积400 ml。
l0×磷酸缓冲液贮存液
KH2PO4(1 mol/L) 136.1 g
(NH4)2SO4(0.15 mol几) 19.8 g
KOH(0.75mol/L)(!) 42.1 g
加水至1 000ml
调pH值至7.0并高压灭菌。
1000×无机盐贮存液
FeCl3(2mmol/L) 32mg
MgSO4·7H2O(0.8 mol/L) 19.72g
加水至100ml
高压灭菌并贮存备用。这种溶液会出现细小的黄色沉淀,用前应重新悬浮。
溶液Ⅱ
在一个2L的烧瓶中混合:
细菌培养用琼脂 20g
蒸馏去离子水 500ml
·溶液I和溶液Ⅱ分开高压。
·冷却至65℃以下时将下述成分加到溶液I中:
葡萄糖或其他糖类加至终浓度为2%
X-gal(20mg/ml, 用二甲基甲酰胺<!>溶解) 2ml
100×维生素贮存液 10ml
.这时包含任何其他的热敏感补料。
.将溶液I和溶液Ⅱ混合在一起,每个平板铺30ml左右。
100×维生素贮存液
维生素B1(硫胺素)(0.04 mg/m1) 4 mg
生物素(2/ug/ml) 0.2mg
维生素B6(0.04 mg/ml) 4mg
肌醇(0.2mg/ml) 20mg
维生素B3(泛酸)(0.04mg/ml) 4mg
H2O 100 ml
用0.22/lm的滤器过滤除菌。
用于在滤膜上裂解酵母细胞的X-gal平板
这些平板是用来检测在Whatman 3MM滤纸上裂解和固定的细胞中的β-半乳糖苷
酶的活性。
细菌培养用琼脂 20g
1 mol/L Na2HPO4 57.7 ml
1 mol/L NaH2PO4 42.3 ml
MgSO4 0.25 g
H2O 900 ml
高压灭菌后,加6ml X-gal溶液(20mg/ml,用二甲基甲酰胺配置)。