超声破碎的条件一般是300w，10s/10s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。
超声前菌体的准备：菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍，然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%Triton X-100。切记冰浴超声！
如何判断是否超声完全：根据网友的经验，一般有以下几个方面：
1.外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。
2.液体的粘滞性：超声后菌液从枪头滴下不粘连。
3.高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点）。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。
4.染色：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟，镜检。
超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。
一些需要注意的问题：1，蛋白以包涵体形式表达，追求的是高破碎率，要求细胞碎片很小，而另一种蛋白是可溶形式表达，所以细胞碎片不能很小，两种情况要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分离。2，如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率太强。3，超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。4，尽量防止泡沫的产生。
建议你用200w破碎，破3s停10s 破碎过程中，探头一定要放置好，不然会产生气泡影响破碎！！
附件: 您所在的用户组无法下载或查看附件
