我现在想同时在酵母中表达3种蛋白，现在查文献所知可以采取
  1.分别构建含不同基因的3个载体，再分别转染酵母菌
  2.构建含有3个基因的载体，再转染酵母菌。
但是 第一种方法 可能效率比较低，所以想采用第二种方法。但是第二种方法 如何构建这个载体我不是很清楚，
另外，如果要三种基因同时表达蛋白，是不是要构建一个多启动子的载体，这种载体具体应该怎么构建呢？
请各位高手指导，万分感谢！

建议你用第一种方法，效率未必低，你可以先转一个，再转另一个。如果可以的话，用不同的筛选标记，比如影响缺陷和g418抗性。商业化的载体一般都只有一个启动子，你表达串联蛋白可能对你的活性有影响，蛋白过长有可能表达不出来。

三种得我没见过，不过我看过表达两种的。你可以看看《高甜度monellin基因和透明颤菌血红蛋白基因在毕赤酵母中的表达》李敏，可能对你有帮助。