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[核酸提取] 【求助】质粒纯化


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1# 大 中 小 发表于 08-5-4 12:36  只看该作者
武林三国

【求助】质粒纯化

质粒转染细胞，已经用BBI的试剂盒提好质粒，想用聚乙二醇法纯化质粒后然后转染，请问一下聚乙二醇法纯化质粒时各种溶液的配制的具体方法，LiCl、聚乙二醇、乙酸铵、酚/氯仿等。谢谢！

搜索更多相关主题的帖子: 质粒 纯化 聚乙二醇 试剂 转染

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2# 大 中 小 发表于 08-5-5 14:13  只看该作者
详见《分子克隆 iii》
钞票并不是万能的，许多时候还要用到信用卡。

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3# 大 中 小 发表于 08-5-5 20:52  只看该作者
武林三国
如果是小量提取的质粒就没必要纯化了，如果是大量提取的可以做纯化，PCR清洁试剂盒可以尝试一下
http://www.51protocol.com/DNA/lianjiezhuanhua/20071030/38724.html
本帖最近评分记录
  • nano 威望 +1 经验之谈 08-5-5 20:58
这条路不光通向成功！

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4# 大 中 小 发表于 08-5-6 13:50  只看该作者
"PCR清洁试剂盒"能否去内毒素呢？因为lz是要做转染的啊
钞票并不是万能的，许多时候还要用到信用卡。

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5# 大 中 小 发表于 08-5-6 15:22  只看该作者
武林三国
谢谢！我是小量提取的，没必要做纯化吗？转染会不会有影响？

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6# 大 中 小 发表于 08-5-6 15:27  只看该作者
还有聚乙二醇纯化质粒用到的是乙酸铵、乙醇铵，还是乙酸钠呢，我都有看到，就不确定到底是用哪一个了！

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7# 大 中 小 发表于 08-5-6 20:03  只看该作者
武林三国

乙酸钠：3mol/L;pH=5.2

乙酸钠：3mol/L;pH=5.2

来源：分子克隆实验指南，第三版

用800ml水溶解408.3G三水乙酸钠，用冰醋酸调PH，定容，高压蒸汽灭菌

[ 本帖最后由 kay0205 于 08-5-6 20:07 编辑 ]
亲爱的甘荻丽娜
我终将远行
风帆扬起，迷雾散尽

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8# 大 中 小 发表于 08-5-6 20:38  只看该作者
恩，多从书上找找，多试试。
钟馗谈专利

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9# 大 中 小 发表于 08-5-6 20:51  只看该作者
武林三国

回复 5# 的帖子

也有很多去内毒素提质粒试剂盒，小量的就几百块钱，做转染足以，这里用试剂盒会比较方便，不像普通质粒提取

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10# 大 中 小 发表于 08-5-7 12:24  只看该作者
谢谢了！

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